주요 차이-PCR 대 RT-PCR
pcr과 rt-pcr은 분자 생물학에서 두 가지 중요한 기술입니다. PCR은 1980 년대 Kary Mullis에 의해 개발되었습니다. 지수 방식으로 특정 유전자의 카피 수를 늘릴 수 있으며, 특정 DNA 단편의 검출을 용이하게한다. taq 중합 효소는 PCR 시스템에서 가장 자주 사용되는 효소입니다. 그것은 온수 효소입니다. RT-PCR에서, 역전사와 PCR이 뒤 따른다. 효소, 역전사 효소는 RNA로부터의 상보적인 DNA의 합성에 관여한다. 주요 차이 PCR과 RT-PCR 사이에는 PCR이 이중 가닥 DNA를 템플릿으로 사용하는 반면 RT-PCR은 RNA가 템플릿으로 RNA를 사용한다는 것입니다.
주요 영역이 적용됩니다
1. pcr
- 정의, 프로세스, 응용 프로그램
2. rt pcr
- 정의, 특성, 응용 프로그램
3. PCR과 RT PCR의 차이점은 무엇입니까
- 주요 차이점 비교
주요 용어 :PCR, RT-PCR, 중합 효소 연쇄 반응, 역전사-폴리머 라제 연쇄 반응, DNA 템플릿, DNA 중합체, 변성, 어닐링, 프라이머 연장 
pcr
pcr ( 폴리머 라제 연쇄 반응 )는 비교적 단순하지만 혁신적인 방법입니다. PCR은 효소, DNA 폴리머 라제의 능력을 사용하여 제공된 주형 가닥에 상보적인 방식으로 새로운 가닥의 DNA를 합성합니다. PCR은 유전자의 기능 분석, 진단 및 유전성 질환의 모니터링, DNA 클로닝, 시퀀싱 및 고대 DNA 증폭에 대한 임상 및 연구 실험실에서 사용되는 필수 기술입니다. DNA 주형, 뉴클레오티드, 프라이머 및 DNA 폴리머 라제는 PCR의 4 가지 주요 성분이다. DNA 템플릿 일반적으로 표적 서열을 갖는 이중 가닥 DNA이며, 이는 증폭되어야한다. taq DNA 폴리머 라제 이것은 Thermus aquatics 에서 분리됩니다 PCR에서 일반적으로 사용됩니다. pfu DNA 폴리머 라제 충실도가 높은 또 다른 유형의 DNA 폴리머 라제입니다. 둘 다 taq 및 pfu 폴리머 라제는 내열성이다. DNA 폴리머 라제에 의해 첨가 된 뉴클레오티드는 아데닌 (A), 구아닌 (G), 시토신 (C) 및 티민 (T)이다. DNA 폴리머 라제는 기존 DNA 가닥의 3 '말단에 새로운 뉴클레오티드를 첨가 할 수 있기 때문에, 올리고 뉴클레오티드 프라이머는 DNA 합성의 개시에 필요하다. PCR에서 프라이머의 요구 사항은 템플릿에서 특정 영역 만 묘사 할 수있게한다. 표적 시퀀스는 전방 및 리버스 프라이머에 의해 측면에있다. PCR이 끝나면 특정 DNA 서열의 암시콘이라는 새로운 사본이 수십억에 달합니다. PCR의 구성 요소는 실패를 최소화하면서 PCR 성능을 향상시키는 방식으로 최적화되어야합니다.
PCR은 열 사이클러가 수행하는 자동화 된 프로세스이며, 이는 다른 온도를 전환 할 수 있습니다. PCR은 3 단계 프로세스입니다.
- denaturation -이중 가닥 DNA 템플릿은 94-95 ° C로 가열하여 2 개의 단일 가닥으로 분리됩니다.
- 어닐링 - 전방 및 역방향 프라이머는 템플릿의 상보 서열에 결합합니다. 이 단계의 온도는 프라이머 조합의 용융 온도에 따라 다릅니다.
- 프라이머 확장 - DNA 폴리머 라제 효소는 성장하는 가닥에 상보한 염기를 추가하여 각 프라이머를 3'end에서 연장합니다. taq의 최적 온도 폴리머 라제, 72 ℃는 연장 단계에서 온도로 사용된다. 확장 시간은 템플릿 스트랜드의 기본 쌍의 수에 따라 다릅니다.
세 단계는 28-35 번 반복됩니다.
그림 1 :중합 효소 연쇄 반응
PCR의 생성물은 DNA 사다리와 비교하여 아가 로스 겔 전기 영동에 의해 크기가 크기입니다. 아가 로스 겔에서 DNA의 시각화는 에티 디움 브로마이드로 염색하고 UV에서 관찰함으로써 수행된다. 에티 디움 브로마이드-염색 된 겔에서 UV 하의 증폭 된 DNA 밴드는도 2에 도시되어있다. DNA 사다리는 가장 왼쪽에 잘 표시됩니다.
그림 2 :DNA 밴드
rt-pcr
rt-pcr ( 역전사-폴리 메라 제 연쇄 반응 )는 mRNA의 검출에 사용되는 가장 민감한 기술 중 하나입니다. RNA는 정상 조직의 유전자 발현 또는 감염된 조직의 유전자 발현에 대한 정보를 수집하기위한 적절한 주형이다. RT-PCR에 대한 주형은 각각 총 RNA 또는 바이러스 또는 박테리아 RNA 일 수있다. RNA는 효소, 역전사 효소에 의해 상보적인 DNA (cDNA)로 역전사된다. 역전사 효소의 최적 온도는 46 ℃이다. cDNA는 생성물을 얻기 위해 PCR에 사용된다. 역전사 PCR의 단계는 그림 3 에 나와 있습니다. .
그림 3 :RT-PCR
rt-pcr은 2 단계 또는 1 단계 반응에서 수행 할 수 있습니다. 2 단계 반응에서, 역전사 및 PCR은 2 단계로 수행된다. 1 단계 RT-PCR에서, 역전사와 순차적 방식으로 단일 튜브로 PCR이 뒤 따른다. cDNA 및 최종 PCR 생성물은 크기 분별 및 시각화 목적으로 아가 로스 겔에서 실행될 수 있습니다. 1 단계 및 2 단계 RT-PCR은도 4에 도시되어있다
그림 4 :1 단계 및 2 단계 RT-PCR
PCR과 RT-PCR의 차이
정의
pcr : PCR은 DNA 서열의 수백만 카피를 생성하는 DNA 세그먼트를 증폭시키기 위해 분자 생물학에서 사용되는 기술입니다.
RT-PCR : RT-PCR은 분자 생물학에서 유전자 발현의 검출에 사용되는 PCR의 변형이다.
단계
PCR : 변성, 어닐링 및 확장은 PCR의 세 단계입니다.
RT-PCR : RT-PCR에서, 역전사와 PCR이 뒤 따른다.
템플릿
PCR : 이중 가닥 DNA 분자는 PCR의 주형 역할을합니다.
RT-PCR : 단일 가닥 RNA 분자는 역전사를위한 주형으로서 작용한다. 단일 가닥 DNA 분자는 PCR의 주형 역할을합니다.
사용 된 효소
PCR : DNA 폴리머 라제는 PCR에서 효소로 사용된다.
RT-PCR : 역전사 효소 및 DNA 폴리머 라제는 RT-PCR에서 효소로 사용됩니다.
프라이머
PCR : 전방 및 리버스 프라이머는 PCR에 사용됩니다.
rt-pcr : 역전 프라이머 만 리버스 전사에 사용되며 전방 및 리버스 프라이머는 PCR에 사용됩니다.
감도
PCR : PCR은 민감한 방법입니다.
RT-PCR : RT-PCR은 PCR보다 더 민감하다.
응용
pcr : PCR은 유전자의 기능 분석, 진단 및 유전성 질환, DNA 클로닝, DNA 시퀀싱 및 고대 DNA 증폭의 모니터링에 사용됩니다.
RT-PCR : RT-PCR은 유전자 발현의 검출에 사용된다.
결론
PCR 및 RT-PCR은 분자 생물학에 사용되는 중요한 기술입니다. PCR 및 RT-PCR은 모두 표적 DNA 서열의 카피 수를 기하 급수적으로 증가시킬 수있는 자동화 된 기술이며, 이는 전방 및 역방향 프라이머에 의해 정의된다. PCR에서, 이중 가닥 DNA는 주형으로 사용된다. PCR에 의해, DNA 클로닝, DNA 시퀀싱 및 유전자의 기능적 분석이 수행 될 수있다. RT-PCR에서, 특정 조직에서의 유전자 발현은 RNA를 증폭시킴으로써 관찰 될 수있다. PCR과 RT-PCR의 주요 차이점은 각 반응 및 응용 분야에 사용 된 템플릿에 있습니다.
참조 :
1. "폴리머 라제 연쇄 반응 (PCR)." 국립 생명 공학 정보 센터. 미국 국립 의학 도서관, n.d. 편물. 여기에서 사용할 수 있습니다. 2017 년 6 월 1 일.
2.”중합 효소 연쇄 반응 (또는 PCR).” 유전자의 클로닝 및 분자 분석. N.P., N.D. 편물. 여기에서 사용할 수 있습니다. 2017 년 6 월 1 일.
3. 뉴 잉글랜드의 Biolabs. "cDNA 합성 &RT-PCR." cDNA 합성 &rt-pcr | 코. N.P., N.D. 편물. 여기에서 사용할 수 있습니다. 2017 년 6 월 1 일.
이미지 제공 :
1. Enzoklop의 "중합체 연쇄 반응"-Commons Wikimedia
2를 통한 자체 작업 (CC By-SA 3.0). Rainis Venta-Commons Wikimedia
3을 통한 자신의 작업 (CC By-SA 3.0). JPARK623의“역전사 폴리머 라제 연쇄 반응”-Commons Wikimedia
4를 통한 자신의 작업 (CC BY-SA 3.0).“1 단계 vs 2 단계 RT-PCR”-JPARK623-COMMONS를 통해 COMMONS를 통해 CMC BY 3.0). Wikimedia
