주요 차이 DNA와 RNA 추출 사이에서 DNA 추출의 pH 수준은 pH 8 인 반면, RNA 추출의 pH 수준은 pH 4.7이다. DNA는 산성 pH에서 변성하고 유기 단계로 이동하는 경향이있다. 알칼리성 pH에서, RNA는 리보스 당에서 2 'OH의 존재로 인해 알칼리성 가수 분해를 겪는다.
DNA와 RNA 추출은 조직 세포로부터 핵산의 분리 및 정제에 관여하는 두 절차이다. 두 절차 모두 세 단계로 구성됩니다. 양질의 DNA와 RNA는 분자 생물학, 생명 공학, 유전체학 및 역학 실험에서 중요한 역할을합니다.
주요 영역을 다루었습니다
1. DNA 추출이란?
- 정의, 절차
2. RNA 추출이란 무엇입니까
- 정의, 절차
3. DNA와 RNA 추출의 유사점은 무엇입니까
- 공통 기능의 개요
4. DNA와 RNA 추출의 차이점은 무엇입니까
- 주요 차이점 비교
주요 용어 :세포 용해, 단백질 변성, DNA 추출, pH, 강수량, RNA 추출
DNA 추출
DNA 추출은 DNA의 분리 및 정제 절차입니다. DNA는 혈액, 냉동 조직 샘플 또는 파라핀 조직 블록으로부터 분리 될 수있다. DNA 추출의 3 단계는 세포 용해, DNA의 분리 및 침전이다. 세포 용해 동안, DNA를 노출시키기 위해 세포막 및 핵막의 막과 같은 세포막 장벽이 열린다. 다음 단계는 샘플에서 막 지질을 제거하는 것입니다. 마지막으로, DNA의 침전은 프로테아제에 의한 DNA 관련 단백질의 제거 및 RNase에 의한 RNA의 제거를 포함한다.
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그림 1 :DNA 추출 절차
DNA 추출의 기본 프로토콜
아래는 DNA 추출의 기본 프로토콜입니다.
1. 세포 용해 완충액을 사용한 세포 용해성 세포막
2. 지질은 세제와 계면 활성제로 분해됩니다
3. 프로테아제를 첨가하여 단백질의 소화
4. RNase
를 추가하여 RNA의 소화5. 농축 염을 첨가 한 후 원심 분리
를 첨가하여 세포 잔해, 소화 된 단백질, 지질 및 RNA의 분리6. 빙냉 에탄올 또는 이소프로판올로 DNA의 에탄올 침전. 나트륨 아세테이트의 이온 강도는 침전을 개선하는 데 사용될 수 있습니다. 침전 된 DNA는 최종 솔루션에서 실로 나타납니다.
그림 2 :추출 된 DNA
페놀 클로로포름 추출은 또한 단백질과 DNA를 분리하는 데 사용될 수 있습니다. 여기서, 페놀은 샘플의 단백질을 거부하고, DNA는 추출 종료시 수성 단계에 남아있다. 그리고 유기 단계에서는 변성 단백질을 찾을 수 있습니다. DNA를 추출하는 또 다른 방법은 미니 콜럼 정제입니다. 여기서, 컬럼에 DNA의 결합은 pH 및 완충액의 염 농도에 의존한다.
RNA 추출
RNA 추출은 샘플에서 RNA를 정제하는 과정을 말합니다. RNA 추출의 기존의 방법은 guanidinium thiocyanate-phenol-chloroform 추출 라고합니다. . 구아니 디늄 티오 시아 네이트 거부 단백질. 또한, 그것은 물 분자의 수소 결합을 방해하고 채집 제로서 작용한다. tri-reagent 라는 RNA 추출에 특수 시약이 사용됩니다. . 그것은 구아니 디늄 티오 시아 네이트, 페놀 및 나트륨 아세테이트를 함유한다. RNA 추출의 기본 단계의 목적은 DNA 추출에서의 목적과 유사하다. RNA 추출 프로토콜은 아래에 설명되어 있습니다.
1. 세포를 빙냉 PBS로 세척하여 세포의 삼투압을 유지한다.
2. 세포를 흡인하고 샘플을 삼각형으로 균질화합니다.
3. 클로로포름을 추가하고 흔들어주십시오.
4. 원심 분리는 3 개의 층을 초래할 수 있습니다. 상단 층은 수성 층이며, 이는 명확합니다. 중간 층 또는 간기는 침전 된 DNA를 함유한다. 하단 층은 유기농 층이며 분홍색입니다.
5. 수성 층을 제거하고 이소프로판올을 첨가하십시오. 원심 분리는 펠렛을 초래할 수 있습니다.
6. 75% 에탄올로 펠렛을 씻으십시오. 펠렛을 말리십시오.
7. 펠렛을 TE 버퍼 또는 물로 녹인다.
그림 3 :RNA의 페놀 클로로포름 추출
RNA 추출은 일반적으로 7 미만의 pH에서 수행됩니다. 알칼리성 pH에서, RNA는 리보스 설탕의 2 '위치에서 OH 그룹의 존재로 인해 알칼리성 가수 분해에 의해 분해되기 쉽다. 또한, RNA는 산성 pH에서 수성 상에 남아있는 경향이있다. 한편, DNA는 산성 pH에서 유기 상으로 변성하고 이동하는 경향이있다. 따라서, DNA 추출은 약 pH 8에서 수행 될 수있다. DNA는 데 옥시 리보스 당으로 구성되며 알칼리성 가수 분해를받지 않는다.
DNA와 RNA 추출 사이의 유사성
- DNA 및 RNA 추출은 생물학적 샘플로부터 핵산의 분리 및 정제와 관련된 절차입니다.
- 두 절차에는 세포 용해, 잔해 및 관련 단백질로부터의 핵산 정제, 추출물의 제조가 포함됩니다.
- 두 절차 모두에서 차가운 조건을 유지해야합니다.
- 혼합물에서 구성 요소의 분리에 원심 분리가 포함됩니다.
- 두 절차 동안 뉴 클레아 제 효소의 활성을 비활성화해야합니다.
- 페놀 클로로포름 추출은 두 가지 유형의 추출의 중요한 단계 중 하나입니다.
- guanidinium thiocyanate는 핵산을 보호하는 데 사용될 수 있습니다.
- RNA의 침전은 이소프로판올로 수행 할 수 있습니다.
- 나트륨 아세테이트의 이온 강도는 핵산의 침전을 개선하는 데 사용됩니다.
- 샘플은 260 nm에서 OD를 측정하여 정량화 할 수 있습니다.
DNA와 RNA 추출의 차이
정의
DNA 추출 : DNA의 분리 및 정제 절차
RNA 추출 : 샘플로부터 RNA를 정제하는 과정
추출 된 핵산의 유형
DNA 추출 : DNA
RNA 추출 : RNA
pH
DNA 추출 : 8
에서 완료되었습니다RNA 추출 : 4.7
에서 완료되었습니다단계
DNA 추출 : 세포막 또는 세포 용해를 파괴하고 막 지질을 제거하고 DNA를 침전시킨다
RNA 추출 : 세포 용해, 구아니 디늄 티오 시아 네이트-페놀 클로로포름 추출, 이소프로 파놀을 사용한 제조
DEPC- 처리 된 물 사용
DNA 추출 : 없음
RNA 추출 : 모든 시약은 DEPC- 처리 된 물로 제조된다
스토리지
DNA 추출 : DNA는 사전에 추출 될 수 있고 배치로 저장됩니다
RNA 추출 : RNA 추출은 다운 스트림 절차 직전에 수행됩니다
장기 저장
DNA 추출 : -20 ° C에서
RNA 추출 : -80 ° C에서
결론
DNA 추출은 pH 8에서 수행됩니다. DNA는 산성 pH에서 거부 할 때 유기 단계로 이동하는 경향이 있습니다. 그러나, 알칼리성 가수 분해에 의한 분해를 방지하기 위해 RNA 추출은 낮은 pH에서 수행된다. DNA 및 RNA 추출의 단계의 기본 목적은 유사하다. DNA와 RNA 추출의 주요 차이점은 각 추출 유형에 사용 된 pH 조건이다.
참조 :
1.“DNA 추출의 기초.” 알래스카 Bioprep 가상 교과서, 알래스카 Bioprep University of Alaska Fairbanks는 여기에서 구입할 수 있습니다. "RNA 분리 및 역전사 프로토콜 :배양 세포." ABCAM, 여기에서 사용할 수 있습니다
이미지 제공 :
1.“그림 17 01 02”CNX OpenStax - (CC By 4.0) Commons Wikimedia
2. Joo Nath의 "DNA 추출"-Commons Wikimedia
3을 통한 Own Own (CC By-SA 4.0). Squidonius (Talk)의“Phoh-Chcl3 추출”-Commons Wikimedia를 통해 자신의 작품 (원본 텍스트 :자체 제작) (공개 도메인)
