1. 관심 유전자의 분리 :
* 출처 : 원하는 유전자는 원래 유기체 (예를 들어, 박테리아, 식물, 동물)로부터 얻어진다.
* 방법 : 여기에는 다음이 포함될 수 있습니다.
* 제한 효소 소화 : 특정 효소는 정확한 서열에서 DNA를 절단한다.
* PCR (중합 효소 연쇄 반응) : 특정 DNA 단편을 증폭시킵니다.
2. 벡터의 준비 :
* 벡터 선택 : 적합한 벡터 (예 :플라스미드, 바이러스)가 선택됩니다. 벡터는 숙주 셀에서 복제 할 수 있어야합니다.
* 제한 효소 소화 : 벡터는 관심 유전자에 사용되는 동일한 제한 효소로 절단되어 호환 가능한 끝을 만듭니다.
* 결찰 : 관심 유전자와 열린 벡터는 DNA 리가 제를 사용하여 결합되어 DNA를 다시 밀봉합니다.
3. 변형 :
* 호스트 셀로 소개 : 재조합 DNA는 숙주 세포 (예를 들어, 박테리아, 효모)에 도입된다.
* 방법 : 일반적인 방법은 다음과 같습니다.
* 화학적 변형 : 세포는 DNA에 대한 투과성을 증가시키는 화학 물질로 처리된다.
* 전기 천공 : 간단한 전기 펄스는 세포막에 임시 기공을 생성합니다.
4. 형질 전환 된 세포의 선택 :
* 마커 유전자 : 벡터는 종종 재조합 DNA를 함유하는 세포의 확인을 허용하는 마커 유전자 (예를 들어, 항생제 내성)를 전달한다.
* 선택적 매체의 성장 : 세포는 항생제를 함유하는 배지에서 성장시킨다. 마커 유전자가있는 세포만이 생존하고 곱할 것입니다.
5. 유전자 생성물 생산 :
* 표현 : 형질 전환 된 세포는 대량으로 성장하고 관심있는 유전자가 발현된다.
* 단백질 생산 : 유전자의 DNA를 mRNA로 전사 한 후, 원하는 단백질로 번역된다.
* 정제 (선택 사항) : 단백질이 원하는 생성물 인 경우, 다른 세포 성분을 제거하도록 정제 될 수 있습니다.
기억해야 할 핵심 사항 :
* 제한 효소 : 이들은 분자 가위처럼 작용하여 특정 서열에서 DNA를 절단하고 다른 DNA 단편에서 호환되는 끝을 갖는 기저 쌍을 만들 수있는 "끈적 끈적한 끝"을 남긴다.
* 벡터 : 이들은 관심있는 유전자를 숙주 세포에 운반하는 차량입니다. 플라스미드는 박테리아에서 독립적으로 복제하는 원형 DNA 조각이다. 바이러스 성 벡터는 유전자를 숙주의 게놈에 통합 할 수 있습니다.
* 마커 유전자 : 이들 유전자는 형질 전환 된 세포의 선택을 허용한다.
* 변환 효율 : 세포에 외래 DNA를 도입하는 과정은 100% 효율적이지 않습니다. 모든 세포가 재조합 DNA를 성공적으로 취하는 것은 아닙니다.
이 프로세스의 특정 측면에 대해 자세한 내용을 원한다면 알려주세요!
