1. 올바른 세포 배양 시스템 선택 :
* 세포 유형 : 셀 유형마다 요구 사항이 다릅니다. 배양하고자하는 세포의 특정 특성 (예 :1 차 세포, 불멸의 세포주, 줄기 세포) 및 연구에서의 목적을 고려하십시오.
* 배양 배지 : 세포가 번성하기 위해 필요한 영양소, 성장 인자 및 호르몬을 제공하는 매체를 선택하십시오.
* 배양 혈관 : 최적의 세포 성장 및 조작을 허용하는 적절한 플라스크, 플레이트 또는 기타 용기를 선택하십시오.
2. 멸균 기술 :
* 무균 기술 : 이것은 당신의 문화를 손상시킬 수있는 박테리아, 곰팡이 또는 기타 미생물의 오염을 방지하기 위해 가장 중요합니다.
* 멸균 : 모든 장비, 미디어 및 시약은 오토 클레이브, 필터 또는 기타 적절한 방법을 사용하여 멸균해야합니다.
* 청소 작업 공간 : 오염 위험을 최소화하기 위해 깨끗하고 체계적인 작업 공간을 유지하십시오.
3. 세포 배양 조건 유지 :
* 온도 : 대부분의 포유 동물 세포는 5% CO2를 가진 가습 인큐베이터에서 37 ℃에서 배양된다. 다른 세포 유형 (예를 들어, 곤충 세포)에 대한 최적의 온도는 다를 수 있습니다.
* 습도 : 습도를 유지하면 배양 배지에서 과도한 증발을 방지하여 세포를 손상시킬 수 있습니다.
* CO2 : CO2는 배양 배지의 pH를 유지하는 데 필수적이며, 이는 세포 생존 및 성장에 중요합니다.
4. 일상적인 유지 보수 :
* 수유 및 하위 배양 :
* 수유 : 배양 배지를 정기적으로 신선한 배지로 교체하여 필수 영양소를 제공하십시오.
* 하위 배양 (패시징) : 세포가 자라면서 과밀해질 것입니다. 건강한 성장을 유지하고 노화를 예방하려면 하위 배양 (세포 분할)이 필요합니다.
* 셀 성장 모니터링 :
* 현미경을 사용하여 세포 형태, 합류 및 오염 징후를 모니터링합니다.
* 세포 계수 방법 (예 :혈구 계, 자동화 된 세포 카운터)을 사용하여 세포 성장을 정량화합니다.
* 문서 : 날짜, 중간 변화, 유명한 및 세포 형태의 관찰 된 변화를 포함하여 모든 세포 배양 절차에 대한 자세한 기록을 유지하십시오.
5. 고급 기술 :
* cryopreservation : 액체 질소의 냉동 세포는 장기간 보존 할 수 있습니다.
* 형질 감염/변환 : 다양한 기술을 사용하여 새로운 유전자 물질을 세포에 소개합니다.
* 차별화 : 세포가 연구 목적으로 특정 세포 유형을 채택하도록 유도합니다.
* 3D 세포 배양 : 생체 내 조건을 모방하기 위해 3 차원 환경에서 세포를 배양합니다.
6. 안전 고려 사항 :
* 생물 안전성 : 특히 잠재적으로 위험한 세포로 작업 할 때 적절한 생체 안전 프로토콜을 따르십시오.
* 폐기물 처리 : 규정에 따라 세포 배양 폐기물을 제대로 폐기하십시오.
* 개인 보호 장비 : 오염을 방지하고 유해 물질로부터 자신을 보호하기 위해 적절한 보호 장비 (예 :장갑, 실험실 코트, 눈 보호)를 착용하십시오.
자원 :
* ATCC (American Type Culture Collection) : 세포주 및 관련 정보를 얻기위한 귀중한 자원.
* 세포 문화 매뉴얼 : 많은 포괄적 인 매뉴얼은 다양한 세포 배양 기술에 대한 자세한 정보를 제공합니다.
기억해야 할 핵심 사항 :
* 품질 관리 : 정기적으로 오염을 확인하고 일관된 세포 형태와 성장을 확인하십시오.
* 재현성 : 실험의 재현성을 보장하기 위해 신중하게 문서 절차.
* 윤리적 고려 사항 : 동물 세포 문화에 대한 윤리적 지침을 따르십시오.
실험실에서 세포를 유지하는 것은 인내심, 세부 사항에 대한 관심 및 지속적인 학습이 필요한 기술입니다. 이러한 지침을 준수하고 문화를 지속적으로 모니터링함으로써 최적의 세포 성장과 연구에 대한 신뢰할 수있는 결과를 보장 할 수 있습니다.
