DNA 추출에 사용 된 화학 물질 :
1. 용해 완충액 :
* 기능 : 열린 세포를 파괴하고 DNA를 방출합니다.
* 구성 요소 :
* 세제 : 세포막 (예 :SDS, Triton X-100)을 방해합니다.
* 소금 : 하전 된 분자를 중화시키고 DNA (예 :NACL)를 안정화시키는 데 도움이됩니다.
* 트리스 버퍼 : 최적의 효소 활성을 위해 pH를 유지합니다.
* edta : 마그네슘과 같은 이성 양이온에 결합하는 킬레이트 제제, DNASE에 의한 DNA 분해를 방지합니다.
2. 단백질 제 K :
* 기능 : DNA에 결합하는 히스톤을 포함한 단백질을 소화합니다.
* 메커니즘 : 단백질 내에서 펩티드 결합을 절단하는 세린 프로테아제.
* 목적 : DNA 분리 및 정제를 방해 할 수있는 단백질을 제거합니다.
3. 페놀/클로로포름 :
* 기능 : 단백질 및 다른 세포 잔해에서 DNA를 분리합니다.
* 메커니즘 : 페놀 거부는 단백질을 거부하고 불용성으로 만듭니다. 클로로포름은 변성으로 작용하여 수성 및 유기 단계를 분리하는 데 도움이됩니다.
* 절차 : 격렬한 흔들림 후, 혼합물은 세 층으로 분리됩니다.
* 최상층 :DNA를 포함하는 수성 상.
* 중간 층 :변성 단백질을 함유하는 간기.
* 바닥 층 :페놀/클로로포름을 함유하는 유기상.
* DNA는 수성 층으로부터 회수된다.
4. 에탄올/이소프로판올 :
* 기능 : 용액으로부터 DNA를 침전시킨다.
* 메커니즘 : DNA는 물에 용해되지만 에탄올 또는 이소프로판올에는 불용성이 있습니다. 첨가 될 때, 이들 알코올은 DNA의 용해도를 감소시켜 용액에서 침전시킨다.
* 절차 : 에탄올 또는 이소프로판올을 첨가 한 후, 혼합물을 원심 분리하여 DNA 펠렛을 수집한다.
5. TE 버퍼 :
* 기능 : 추출 후 DNA를 재구성하고 저장합니다.
* 구성 요소 :
* 트리스 버퍼 : 최적의 DNA 안정성을 위해 pH를 유지합니다.
* edta : DNases를 억제하는 킬레이트 제.
* 목적 : DNA가 저장 중에 손상되지 않은 상태로 유지되도록합니다.
6. rnase a :
* 기능 : RNA 오염을 제거합니다.
* 메커니즘 : RNA를 구체적으로 분해하는 효소.
* 목적 : PCR 또는 시퀀싱과 같은 다운 스트림 응용에 대한 순수한 DNA 샘플을 보장합니다.
참고 : 일부 프로토콜은 용해에 대한 구아니딘 히드로 클로라이드 또는 구아니딘 티오 시아 네이트와 같은 다른 화학 물질 또는 페놀/클로로포름 대신 DNA 결합 및 정제를위한 실리카 컬럼을 사용할 수 있습니다.
