Southern Blotting은 샘플 내에서 특정 DNA 단편의 검출에 사용되는 기술입니다. 블 롯팅 기술은 겔 전기 영동을 통한 크기에 기초한 DNA 단편의 분리, 크기 분별 된 DNA 샘플을 필터 막으로 전달하고, 표지 된 서열-특이 적 프로브로 특정 DNA 단편을 혼성화하고, 표지 된 밴드를 검출한다.
.샘플에서 특정 DNA의 식별, 특정 유형의 DNA의 크기 및 풍부도는 남부 블 롯팅에 의해 결정될 수 있습니다. 남부 블로 팅과 관련된 과정은이 기사에 설명되어 있습니다.
주요 영역이 적용됩니다
1. 남부 블로 팅이란?
- 정의, 원리, 응용 프로그램
2. 남부 블로 팅은 어떻게 작동합니까
- 남부 블로 팅 과정
주요 용어 :DNA, 겔 전기 영동, 하이브리드 화 프로브, 나일론 멤브레인, 제한 소화, 남부 블로 팅
남부 블로 팅
Southern Blotting은 샘플에서 특정 DNA를 식별하는 데 사용되는 혼성화 기술입니다. 이 기술은 1975 년 Edward M. Southern에 의해 처음 개발되었습니다.이 과정은 샘플 내에서 특정 DNA 서열의 DNA 서열, 크기 및 풍부함을 식별합니다.
.남쪽 블 롯팅 막은 도 1에 도시되어있다.
그림 1 :남부 블 롯팅 멤브레인
남부 블 롯팅의 응용
남부 블 롯팅의 응용은 다음과 같습니다.
- 특정 DNA 단편을 탐지합니다
- 특정 DNA 단편을 분리하기 위해
- 돌연변이 및 유전자 재 배열을 확인하기 위해
- RFLP 분석 (제한 단편 길이 다형성)
- 유전 질환을 식별하기 위해
- 감염제를 식별하기 위해
- 친자 테스트 범죄자를 식별하기 위해 DNA 지문에서
Southern Blotting은 어떻게 작동합니까
Southern Blotting은 겔 전기 영동을 통한 크기에 기초하여 DNA 단편의 분리를 포함하여 막으로 옮기고, 표지 된 서열-특이 적 프로브로 이들을 혼성화하고, 표지 된 밴드를 검출합니다. 남부 블로 팅의 단계는 아래에 설명되어 있습니다.
- DNA 소화 - DNA 샘플은 DNA 단편을 얻기 위해 제한 효소에 의해 소화되고, 이들 단편은 PCR에 의해 증폭된다. .
- 겔 전기 영동-DNA 단편은 겔 전기 영동에 의해 크기 분화됩니다.
- denaturation -분별 된 DNA를 갖는 겔은 NaOH 또는 HCl에 담그기 위해 이중 가닥 DNA를 변성시킨다.
- blotting -겔의 DNA 단편은 블 롯팅이라는 공정에 의해 양의 차전 된 나일론 멤브레인으로 옮겨집니다.
- 베이킹 및 차단 - DNA 단편이있는 블 롯팅 페이퍼는 막에 DNA를 고정하기 위해 구운 것입니다. 그런 다음, 비 빈 결합 부위는 소 혈청 알부민 (BSA) 또는 카세인으로 처리하여 포화됩니다. .
- 라벨이 붙은 프로브를 사용한 하이브리드 화 - DNA 결합 막은 관심있는 DNA 단편에 대한 상보적인 뉴클레오티드 서열을 함유하는 표지 된 프로브로 처리된다. 혼성화 프로브는 일반적으로 길이가 100-500bp이며 방사능 뉴클레오티드로 표시됩니다.
- 자동 방사선 - 프로브 결합 막은 Autoradiogram에서 시각화되어 관심있는 DNA 단편의 패턴을 얻습니다.
그림 2 :남부 블로 팅
남부 블로 팅의 전체 과정은 그림 2 에 표시됩니다. .
결론
Southern Blotting은 샘플로부터 특정 DNA 서열을 식별하는 데 사용되는 혼성화 기술입니다. 이 과정에서, DNA 샘플은 제한 효소에 의해 분별되고, 혼합물은 겔상에서 실행된다. 그런 다음, 겔의 밴딩 패턴을 나일론 멤브레인으로 옮기고 표지 된 프로브로 혼성화하여 관심있는 조각을 검출 할 수 있습니다.
.참조 :
1.“남부 블 롯팅.” Thermo Fisher Scientific , 여기에서 사용할 수 있습니다.
이미지 제공 :
1. Bojan žunar의“Southern Blot Membrane”-Commons Wikimedia
2를 통한 소유의 작업 (CC By-SA 4.0). CNX OpenStax의 "그림 17 01 05" - Commons Wikimedia를 통한 CC x 4.0)
