웨스턴 블 롯팅은 샘플 내에서 특정 단백질의 검출에 사용되는 분자 생물학 기술입니다. SDS-PAGE를 사용하여 크기에 따라 단백질을 분리하고 이들 분리 된 단백질을 막으로 옮긴다. 이 기술은 블롯에서 특정 단백질의 표지에서 특정 1 차 항체를 사용합니다. 리포터 단백질로 표지 된 이차 항체는 1 차 항체와 함께 labled 단백질을 검출합니다.
주요 영역이 적용됩니다
1. 웨스턴 블 롯팅이란?
- 정의, 사실, 응용 프로그램
2. 서부 블로 팅은 어떻게 작동합니까
- 웨스턴 블 롯팅 과정
주요 용어 :색상 개발, 니트로 셀룰로스 막, 1 차 항체, 2 차 항체, 웨스턴 블 롯팅
웨스턴 블 롯팅이란?
Western Blotting은 샘플 내에서 특정 단백질의 검출에 사용되는 혼성화 기술입니다. 이 기술은 관심있는 단백질을 표지하고 항체-표지 된 단백질의 검출을 위해 항체를 사용하기 때문에 면역 블 롯팅이라고도합니다.
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그림 1 :웨스턴 블롯
Western Blotting은 1979 년 Towbin에 의해 처음 개발되었으며 현재 단백질 분석의 일상적인 기술로 사용됩니다.
서부 블로 팅은 어떻게 작동합니까
웨스턴 블 롯팅은 주로 샘플에서 특정 단백질의 탐지에 사용됩니다. 웨스턴 블 롯팅 기술의 단계는 아래에 설명되어 있습니다.
- sds-page -단백질 샘플은 SDS-PAGE에 의해 크기에 따라 분리됩니다.
- 단백질을 막으로 옮기는 -크기 분별 된 단백질은 니트로 셀룰로스 또는 폴리 비닐 리덴 디 플루오 라이드 (PVDF) 막으로 옮겨진다. 이 전달과 관련된 기술은 확산 전달입니다.
- 비특이적 사이트 차단 -막의 비어있는 부위는 단백질의 비특이적 결합을 방지하기 위해 차단된다. 비 지방 건조 우유 또는 소 혈청 알부민 (BSA) 은이 목적으로 사용될 수 있습니다.
- 1 차 항체 인큐베이션 - 차단 된 막은 1 차 항체 용액과 함께 배양된다. 이 1 차 항체는 막상의 특정 단백질에 결합합니다.
- 2 차 항체 인큐베이션 - 막에 1 차 항체에 결합하는 이차 항체와 함께 배양된다. 이차 항체는 리포터 단백질에 접합된다. 이들 리포터 단백질은 비오틴, 알칼리성 포스파타제 또는 양 고추 냉이 퍼 옥시 다제 일 수있다.
- 색상 개발에 의한 단백질 탐지 - 공액 효소 리포터는 기질과 반응하여 유색 알칼리성 포스파타제를 생성하여 BCIP를 파란색 제품으로 전환하는 반면 양 고추 냉이 퍼 옥시 다제는 루미올을 전환하여 발광을 방출합니다. .
그림 2 :웨스턴 블 롯팅 - 절차
결론
웨스턴 블 롯팅은 샘플 내에서 특정 단백질의 존재를 탐지하는 데 사용되는 혼성화 기술입니다. SDS-PAGE를 사용하여 크기 및 1 차 항체와의 결합에 따라 단백질을 분리하는데, 이는 색상 발달 동안 2 차 항체에 의해 인식 될 수 있습니다.
.참조 :
1. Boster , 여기에서 사용할 수 있습니다.
이미지 제공 :
1. Timvickers의“항 리포 산 면역 블롯”-Commons Wikimedia
2를 통한 자신의 작업 (CC By-SA 3.0).
