주요 차이 직접 및 간접적 인 ELISA 사이에서 직접 ELISA에서 , 1 차 항체는 검출 효소와 직접 접합되는 반면, 간접적 인 ELISA에서는 1 차 항체에 상보적인 2 차 항체가 검출 효소와 결합된다는 것입니다. . 이것은 Direct Elisa가 단일 항체를 사용하는 반면 간접 Elisa는 두 개의 항체를 사용한다는 것을 의미합니다.
직접 및 간접 ELISA는 배지에서 특정 항원 또는 항체의 존재를 검출하는 데 사용되는 ELISA (효소-연결 면역 흡수 분석)의 두 가지 방법입니다.
.주요 영역을 다루었습니다
1. 직접 엘리사
- 정의, 절차, 특성
2. 간접적 인 Elisa
- 정의, 절차, 특성
3. 직접 및 간접 Elisa의 유사점은 무엇입니까
- 일반적인 기능의 개요
4. 직간접 Elisa 의 차이점은 무엇입니까?
- 주요 차이점 비교
주요 용어
직접 ELISA, 검출 효소, 간접 ELISA, 1 차 항체, 2 차 항체, 기질
Direct Elisa
Direct Elisa는 효소-연결된 1 차 항체 자체로 항원을 검출 할 수있는 ELISA의 방법입니다. 이 ELISA 방법은 처음으로 Perlmann과 Engvall을 개발했습니다. 그것은 가장 간단한 형태의 Elisa로 간주됩니다. 직접 Elisa의 단계는 다음과 같습니다.
- 샘플과 플레이트 표면을 코팅;
- 효소-접합 된 1 차 항체와 플레이트의 배양;
- 플레이트에서 비 결합 항체 제거를위한 세척;
- 효소 반응에 의해 요구되는 기질의 첨가;
- 플레이트에서 생성 된 신호의 검출.
여기서, 1 차 항체와 결합 된 두 가지 주요 유형의 효소는 HRP (양 고추 냉이 퍼 옥시 다제) 및 알칼리성 포스파타제입니다. HRP와 함께 사용되는 세 가지 유형의 기질은 OPD (O- 페닐 렌 디아민 디 하이드로 클로라이드), TMB (3, 3 ', 5, 5'- 테트라 메틸 벤지딘) 및 ABTS (2, 2'-AZINOBIS [3- 에틸 벤조 티아 졸린 -6- 공극산-디아몬 늄 염)이다. 알칼리성 포스파타제와 함께 사용 된 기질은 PNPP (P- 니트로 페닐 포스페이트, 디스 소듐 염)이다. 기질에 대한 효소 반응은 배지에서 색 변화를 야기하며, 이는 기질의 유형과 반응에 사용 된 효소에 의존한다. 이것은 표적 항원으로 샘플의 검출을 용이하게한다.
그림 1 :Direct Elisa
Direct Elisa는 샘플에서 고 분자량 항원량의 검출에 더 적합합니다. 이 ELISA 방법의 단계가 적 으면 더 빠른 분석법이됩니다. 그러나, 효소와 1 차 항체의 표지와 통합 된 비용 및 시간으로 인해, 직접 ELISA의 사용은 매우 드 rare니다. 반면에, 그것은 표적 항원에도 부작용을 일으킨다.
간접 Elisa
간접 ELISA는 검출을 위해 두 가지 항체를 사용하는 ELISA의 또 다른 방법입니다 :1 차 및 2 차 항체. 간접 ELISA의 단계는 다음과 같습니다.
- 샘플과 플레이트 표면을 코팅;
- 일차 항체와 플레이트의 인큐베이션;
- 접시에서 결합되지 않은 항체를 제거하기 위해 세척;
- 검출 효소와 접합 된 2 차 항체와 플레이트의 배양;
- 접시에서 결합되지 않은 항체를 제거하기 위해 세척;
- 효소 반응에 의해 요구되는 기질의 첨가;
- 플레이트에서 생성 된 신호의 검출.
그림 2 :간접 엘리사
간접 ELISA는 두 가지 항체 결합 단계를 진행합니다. 한편, 2 차 항체는 검출 효소와 접합된다. 일반적으로, 효소와 접합 된 이차 항체가 많이있다. 여기서, 2 차 항체는 주로 폴리 클로 날, 항 종양 항체이다. 효소-접합 된 항체의 이용 가능성으로 인해, 간접 ELISA 방법은 기생충, 박테리아 및 바이러스의 검출에서 면역 학적 분석에 더 자주 사용된다. 한편, 몇 가지 2 차 항체는 플레이트의 1 차 항체에 결합 될 수있다. 따라서 분석의 민감도는 매우 높습니다.
직간접 ELISA의 유사성
- 직접 및 간접 Elisa는 관심있는 항원이 플레이트에 직접 부착되는 ELISA의 두 가지 방법입니다.
- 두 방법 모두 샘플에서 특정 단백질 분자의 존재를 검출하는 데 포함됩니다. 이 단백질 분자는 플레이트에 직접 부착된다.
- 96- 웰 플레이트 또는 8- 웰 스트립 튜브는 두 방법 모두에 사용됩니다. 이 판과 튜브는 모두 폴리스티렌으로 구성됩니다. 96- 웰 플레이트는 반응에 대한 최적의 희석을 결정하기위한 많은 공간을 제공한다. 한편, 8- 웰 스트립 튜브는 미세 조정 된 분석법에 더 좋습니다.
직접 및 간접 ELISA의 차이
정의
Direct ELISA는 1 차 항체가 검출 효소와 결합되는 ELISA의 유형을 지칭하는 반면, 간접 ELISA는 2 차 항체가 검출 효소와 공동으로 공동화되는 ELISA의 유형을 나타냅니다.
.사용 된 항체 수
Direct Elisa는 하나의 항체를 사용하는데,이 항체는 1 차 항체 인 반면 간접 Elisa는 1 차 및 2 차 항체의 두 가지 항체를 사용합니다. 이것이 직접 및 간접 Elisa의 주요 차이점입니다.
검출 효소는
에 연결되어 있습니다또한 검출 효소는 직접 ELISA의 1 차 항체와 연결되어 있고 검출 효소는 간접 ELISA의 2 차 항체와 연결되어 있습니다.
신호 강도
직접 및 간접적 인 ELISA의 또 다른 차이점 ELISA가 생성 한 신호는 덜 집중적이며 간접 ELISA가 생성 한 신호는 신호 증폭으로 인해 더 집중적이라는 것입니다.
.배경 신호
그러나 직접 Elisa는 간접 Elisa보다 더 많은 배경 신호를 생성합니다.
감도
Direct Elisa는 덜 민감하지만 간접 Elisa는 더 민감합니다. 이것은 또한 직간접 ELISA의 차이입니다.
교차 반응성
그러나 간접적 인 ELISA의 또 다른 차이점은 교차 반응성입니다. 즉, 교차 반응성은 직접 엘리사에서 최소이며 간접적 인 ELISA에서는 중요합니다.
시간
Direct Elisa는 단계가 적기 때문에 시간이 덜 소요됩니다.
사용 빈도
Direct Elisa는 비교적 드물지만 간접적 인 Elisa는 더 일반적입니다.
결론
Direct Elisa는 특정 항원의 검출을 위해 1 차 항체 만 사용합니다. 이것은 1 차 항체가 직접 ELISA에서 검출 효소와 접합된다는 것을 의미한다. 그러나, 간접 ELISA는 1 차 항체를 사용하여 항원과 결합하는 반면, 효소-접합 된 이차 항체는 1 차 항체에 결합한다. 직접 ELISA는 효소-접합 된 1 차 항체의 이용 가능성이 적기 때문에 덜 일반적입니다. 직간접 ELISA의 주요 차이점은 사용 된 항체의 수입니다.
참조 :
1.“Elisa의 유형.” bio-rad , Bio-Rad Laboratories, 여기에서 구할 수 있습니다
이미지 제공 :
1. Cavitri의“Elisa 다이어그램” - Commons Wikimedia
2를 통한 자신의 작업 (CC x 3.0). Cawang의“Indirect Elisa” - Commons Wikimedia를 통한 Own Work (CC0)
