Maxam Gilbert와 Sanger 시퀀싱의 차이점은 무엇입니까?

Maxam Gilbert와 Sanger 시퀀싱은 1970 년대 중반에 개발 된 두 가지 기존 DNA 시퀀싱 방법입니다. 일반적으로, 이들은 DNA 분자에서 뉴클레오티드 염기를 결정하는 책임이있다.  

주요 영역을 다루었습니다

1. Maxam Gilbert 시퀀싱
- 정의, 프로세스, 중요성
2. Sanger 시퀀싱이란 무엇입니까
- 정의, 프로세스, 중요성
3. Maxam Gilbert와 Sanger 시퀀싱의 유사점은 무엇입니까
- 일반적인 기능의 개요
4. Maxam Gilbert와 Sanger 시퀀싱의 차이점은 무엇입니까
- 주요 차이점 비교

주요 용어

기존 방법, DNA 시퀀싱, Maxam Gilbert 시퀀싱, Sanger 시퀀싱

Maxam Gilbert 시퀀싱이란?

Maxam Gilbert 시퀀싱은 1977-1980 년 Allan Maxam과 Walter Gilbert가 개발 한 두 가지 기존 DNA 시퀀싱 방법 중 하나입니다. 또한, DNA 시퀀싱의 화학적 방법으로 알려져 있습니다. 

개요

기본적 으로이 방법은 화학 물질과 DNA 분자의 말단 표지와 4 가지 다른 화학 반응에서 DNA의 염기를 변형시키는 것을 포함합니다. 이어서, DNA는 변형 된 A + G, G, C + T 및 C 염기의 부착 지점에서 절단된다. 다음으로, 방사성 단편은 표지 된 끝에서 뉴클레오티드 염기의 위치까지 연장되는 합성된다. 결국, 페이지는 파손 지점을 분리하여 4 개의 DNA 기초 각각에 대해 4 개의 다른 절단 패턴을 생성합니다. 

화학

Maxam Gilbert 시퀀싱의 단계 :

Gamma-32p ATP 및 정제를 사용한 키나제 반응에 의한 5 '말단의
1. 방사성 표지
2. A+ G, G, C+ T, C 염기에 대한 4 가지 화학적 처리 (A+ G) 포름산에 의한 퓨린 (A+ G), 디메틸 설페이트에 의한 구아닌 (g)의 메틸화, 히드라진에 의한 피리 미딘 (C+ T)의 가수 분해 및 chomeriz에 의한 히트륨에 의한 히드라민 반응에 의한 히드라민 반응의 억제 (C+ T)의 가수 분해, (C+ T) 핫 파이페리딘에 의한 변형 된 DNA의 절단;  (CH2) 변형 된베이스의 위치에서 (CH2) 5NH는 방사성 표지 된 끝에서 첫 번째 '컷'사이트까지 일련의 표지 된 조각을 생성합니다.  
3. 페이지에서 단편의 크기 분류 (폴리 아크릴 아미드 겔 전기 영동).  
4. 자동 방사선 촬영에 의한 시각화, 시퀀스를 추론합니다.

   그림 1 :Maxam Gilbert 시퀀싱

중요도

기본적으로 Maxam Gilbert 시퀀싱의 두 가지 주요 기능은 민감하고 구체적이라는 것입니다. 따라서 기지간에 좋은 구별을 제공 할 수 있습니다. 그럼에도 불구하고 200-300베이스의 시퀀스를 분석하는 데 며칠이 걸립니다. 반면에, 그것은 방사성 원소와 뉴로 독소 인 히드라진을 모두 사용합니다.  

Sanger 시퀀싱이란 무엇입니까

Sanger 시퀀싱은 1977 년 Frederick Sanger와 동료들이 개발 한 두 번째 기존 DNA 시퀀싱 방법입니다. 

개요

일반적으로 Sanger 시퀀싱은 DNA 폴리머 라제에 의한 시험 관내 DNA 복제를 통한 사슬-말단 디드 옥시 뉴클레오티드 (DDNTP)의 혼입에 기초하여 사슬 종결 방법으로도 알려져있다. 유의하게, DDNTPS는 들어오는 뉴클레오티드와의 포스 포디 에스터 결합 형성을 담당하는 3'-OH 그룹이 부족하여, DNA 폴리머 라제가 변형 된 DDNTP의 혼입과 함께 DNA의 연장을 중단시킬 수있다. 또한, 이들 DDNTP는 방사능 또는 형광으로 표지되어베이스의 검출이 가능하다. 

화학

Sanger 시퀀싱의 단계는 :

DDATP, DDCTP, DDGTP 및 DDTTP와의 4 개의 개별 시퀀싱 반응으로의 DNA 샘플의
1. 분할. 
2. 형광 표지 (녹색 염료가 포함 된 DDATP, 파란색 염료가있는 DDCTP, 노란색 염료가있는 DDGTP 및 적색 염료가있는 DDTTP)
3. 상응하는 DDNTP와 별도의 PCR 반응을 수행합니다. 여기서, dideoxynucleotide 농도는 상응하는 데 옥시 뉴클레오티드의 것보다 대략 100 배 낮어야한다.   
4. 변성 폴리 아크릴 아미드-우레아 겔에서 앰플 리콘의 열 변성 및 분리. 4 개의 반응은 4 개의 개별 레인 중 하나 (레인 A, T, G, C)에서 실행됩니다.    
5. 시각화 및 DNA 서열의 결정.

   그림 2 :Sanger 시퀀싱

중요성

크게, Sanger 시퀀싱은 매우 단순화 된 DNA 시퀀싱 방법입니다. 따라서,이 방법의 출현은 DNA 시퀀싱을 향상시켜 다양한 유전자 및 유기체에 대한 서열 데이터를보다 빠르게 축적 할 수있게한다. 그러나 그 과정에서 많은 위험한 화학 물질을 사용하지 않습니다. 그럼에도 불구하고, Sanger 시퀀싱 방법의 민감도는 비교적 낮다. 

Maxam Gilbert와 Sanger 시퀀싱의 유사성

• Maxam Gilbert 및 Sanger 시퀀싱은 DNA 시퀀싱의 두 가지 기존 방법입니다.  
• 또한 1 세대 시퀀싱 방법입니다.  
• 상당히 자동 시퀀싱과 비교할 때 시간이 많이 걸리고 번거 롭습니다.  
• 또한 최대 500 개의 기본의 짧은 DNA 단편을 분석 할 수 있습니다.  
• 그러나 DNA 단편의 두 스트랜드는 시퀀싱 될 수 있습니다.  
• 일반적으로 그들의 원칙은 차세대 시퀀싱 방법의 개발로 이어졌습니다. 

Maxam Gilbert와 Sanger 시퀀싱의 차이

정의

Maxam Gilbert 시퀀싱은 뉴클레오티드 특이 적 부분 화학적 변형 및 후속 DNA 절단에 기초한 DNA 시퀀싱 방법을 지칭한다.  대조적으로, Sanger 시퀀싱은 시험 관내에서 DNA 폴리머 라제에 의해 사슬-말단 디드 옥시 뉴클레오티드의 선택적 혼입 과정을 지칭한다. DNA 복제. 

Maxam Gilbert 시퀀싱은 1977-1980 년 Allan Maxam과 Walter Gilbert에 의해 개발되었으며 Sanger 시퀀싱은 1977 년 Frederick Sanger와 동료들에 의해 개발되었습니다.

알려진

Maxam Gilbert 시퀀싱은 시퀀싱의 화학적 방법이며 Sanger 시퀀싱은 체인 종결 방법입니다. 

화학 물질

Maxam Gilbert 시퀀싱은 방사성 물질 및 히드라진을 포함한 많은 위험한 화학 물질을 사용하는 반면, Sanger 시퀀싱은 덜 위험한 화학 물질을 사용합니다. 

감도와 특이성

Maxam Gilbert 시퀀싱은 매우 민감하고 매우 구체적이며 Sanger 시퀀싱은 덜 민감하고 덜 구체적입니다. 

결론

Maxam Gilbert 시퀀싱은 두 가지 기존 DNA 시퀀싱 방법 중 하나입니다. 일반적으로, DNA 가닥에서 뉴클레오티드 염기의 특이 적 변형을 위해 다양한 화학 물질을 사용합니다. 궁극적으로, 변형 된 부위에서 DNA의 절단은 염기를 결정할 수있게한다. 이 방법은 더 민감하고 구체적입니다. 그러나 위험한 화학 물질을 사용합니다. 대조적으로, Sanger 시퀀싱은 널리 사용되고있는 두 번째 기존 DNA 시퀀싱 방법이다. 일반적으로, 표지 된 DDNTP를 사용하여 4 개의 뉴클레오티드 각각에서 DNA 복제 동안 사슬 성장을 종료시킨다. 마지막으로, 겔상의 종료 된 앰플 리콘의 분리는 DNA 서열의 결정을 허용한다. 그러나이 방법은 첫 번째 방법과 관련하여 덜 구체적이며 덜 민감합니다. 그럼에도 불구하고 그것은 덜 위험한 화학 물질을 사용합니다. 따라서 Maxam Gilbert와 Sanger 시퀀싱의 주요 차이점은 방법과 중요성입니다. 

참조 :

1.“DNA 시퀀싱.”  통합 된 DNA 기술 . 여기에서 사용할 수 있습니다.

이미지 제공 :

1. Incnis MRSI의“Maxam-Gilbert 시퀀싱 EN”. 원본은 여기에서 볼 수 있습니다 :Maxam-Gilbert 시퀀싱 .svg. (CC BY-SA 3.0) Commons Wikimedia
2를 통한. Estevezj의 "Sanger-Sectencing"-Commons Wikimedia를 통해 자신의 작업 (CC By-SA 3.0)