면역 블롯과 웨스턴 블롯의 차이에 관해 면역 블롯은 웨스턴 블롯의보다 정확한 이름이며, 이는 분자 생물학 및 샘플에 존재하는 특정 단백질을 탐지하는 면역 생성 기술입니다. 항체는 웨스턴 블롯의 과정에 참여하기 때문에 면역 블롯으로 더 정확하게 명명 될 수 있습니다. 따라서 원리, 방법론 또는 응용 분야에서 면역 블롯과 웨스턴 블롯 사이에는 유의 한 차이가 없습니다.
기본적으로 웨스턴 블롯에서 단백질은 겔 전기 영동에 의한 변성 및 크기 분리를 겪습니다. 이어서, 분리 된 단백질 밴드는 블 롯팅으로 알려진 과정에서 니트로 셀룰로스 또는 PVDF와 같은 캐리어 막으로 옮겨진다. 궁극적으로, 형광, 방사성 라벨 또는 리포터 효소와 접합 된 항체는 막에서 특정 단백질의 인식에 참여한다.
주요 영역을 다루었습니다
1. 면역 블롯이란 무엇인가
- 간단한 설명
2. 면역 블롯의 방법론
- 단백질의 동일한 하중, 단백질 분리, 전기 영동 전달, 항체 프로빙
3. 면역 블롯의 적용
- 생화학, 임상 적용
4. 웨스턴 블롯이란?
- 간단한 설명
주요 용어
단백질, 면역 블롯, 1 차 항체, 2 차 항체, 웨스턴 블롯의 검출
Immunoblot
면역 블롯은 분자 생물학에서 가장 자주 사용되는 기술과 샘플에서 특정 단백질을 검출하기위한 면역 생성 기술입니다. 일반적 으로이 기술은 단백질 검출을위한 안티의 사용으로 인해 더 구체적으로 '면역 블롯'이라고합니다.
그림 1 :면역 블롯
스위스 바젤에있는 Friedrich Miescher Institute의 Harry Towbin 실험실 이이 방법을 개발했습니다. 여기서, 면역 블롯의 원리는 단백질의 동일한 하중, 분자량에 의한 단백질 분리, 적합한 막으로의 단백질의 전기 영동 전달 및 항체의 프로브를 포함한다.
면역 블롯의 방법론
단백질의 동일한 하중
일반적으로 면역 블롯의 각 샘플 당 동일한 농도의 단백질을 갖는 것이 중요합니다. 기본적으로, 각 샘플의 세 가지 성분은 단백질 추출물, 세포 용해 완충액 및 샘플 완충액이다. 여기서, 세포 용해 완충액은 원하는 단백질 농도로 단백질 추출물의 정규화에 중요하다. 또한, 샘플 버퍼 또는 Laemmli 완충액은 면역 블롯 샘플 준비에 고유합니다. SDS-PAGE에서 기능을 수행하는 시약이 포함되어 있습니다. 또한, 그것은 Tris-HCl pH 6.80 글리세롤, SDS, 베타-메르 캅토 에탄올 및 브로 모 페놀 블루를 함유한다.
tris-hcl pH 6.80은 불연속 버퍼 시스템과 컨쥬 게이션에서 작동합니다. 또한, 글리세롤은 하중하는 동안 샘플에 밀도를 첨가합니다. 이들 외에도, SDS는 강력한 이온 세제, 코팅 변성 단백질을 동일한 음이온 대 질량 비율로 코팅합니다. 따라서, 이것은 단백질의 전하, 크기 및 형상을 가리며, 분자량의 기능으로서 단백질의 분리를 허용한다. 한편, 베타-메르 캅토 에탄올은 이황화 결합을 감소시켜 단백질의 모양을 어느 정도 유지합니다. 또한, 브로 모 페놀 블루는 겔 전기 영동 동안 염료 전선 역할을한다.
분자량에 의한 단백질의 분리
위의 후에 SDS-PAGE는 세제 및 불연속 버퍼 시스템의 도움으로 분자량으로 샘플을 분리 할 수 있습니다. 일반적으로, 샘플은 겔에 로딩하기 전에 열 자기화되어 단량체 분자량을 통한 분리를 보장한다. 또한 SDS-PAGE의 세제는 SDS입니다.
그림 2 :SDS-PAGE
또한 불연속 버퍼 시스템에는 두 개의 버퍼가 포함됩니다. 작동 버퍼 및 전극 버퍼.
전기 영동 전달
일반적으로, 여러 개의 블로 팅 방법은 다른 막으로 단백질의 전기 영동 전달과 관련이 있습니다. 그러나 그들의 원칙은 비슷합니다. 이것은 음의 차전 된 샘플의 양극으로 이동하는 것입니다.
그림 3 :전기 영동 전달
이 과정에서 니트로 셀룰로스는 PVDF 막의 출현까지 막의 금 표준이었습니다. 중요하게도, 이들 막은 전자에 대해 더 높은 단백질 결합 능력을 갖는다.
항체 조사
궁극적으로 두 가지 유형의 항체가 조사 및 분석에 참여합니다. 그것들은 1 차 및 2 차 항체입니다. 이제 단백질이 막에 있습니다. 따라서, 1 차 항체는 막상의 단백질의 특정 영역에 직접 결합한다. 한편, 2 차 항체는 1 차 항체에 의해 특정 단백질에 간접적으로 결합한다. 중요하게도, 차단은 항체 프로빙 전에 막에서 나머지 표면적을 코팅하는 절차입니다. 따라서 이것은 배경을 줄여 오 탐지를 제거합니다. 또한, 차단 완충액은 카제인 또는 소 혈청 알부민 (BSA)을 함유하고; 모두 샘플 단백질에 대한 친화력이 낮습니다. 게다가, 두 개의 항체 유형 각각과 막의 인큐베이션 후 세척 단계는 또한 배경 감소에 중요하다.
그림 4 :항체 조사
또한, 2 차 항체는 일반적으로 분석을위한 성분 특이 적과 접합합니다. 여기서,이 성분은 방사성 동위 원소, 형광 단 또는보다 일반적으로 양 고추 냉이 퍼 옥시 다제 (HRP) 또는 알칼리성 포스파타제 (AP)와 같은 리포터 효소 일 수있다. 중요하게도, 화학 발광 방법에서의 분석에서 효소의 사용은 비색 분석을 통해 막에서 결합 된 항체의 검출을 허용한다.
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그림 5 :화학 발광 검출
마지막으로, 막상의 밴드의 시각화는 사용 된 1 차 항체에 대한 특정 단백질의 존재를 검증합니다.
응용 프로그램
일반적으로 생화학에서 면역 블롯은 단일 단백질 또는 단백질 변형의 질적 검출에 광범위하게 중요합니다. 또한 밴드의 크기와 색상 강도는 반 자격 분석을 제공합니다. 따라서, 면역 블롯은 클로닝 후 단백질 생성의 검증에 중요하다.
임상 적으로 면역 블롯은 혈청과 소변에서 항 -HIV 항체의 검출에 중요한 역할을합니다. 일반적으로 ELISA 검사 후 HIV 진단을 확인하는 것이 중요하며, 이는 잘못된 양성을 줄 수 있습니다. 또한 변형 Creutzfeldt-Jakob 질병, 소 해면 뇌병증 또는 Mad Cow 질병, 라임 병 등의 검출에 중요합니다.
웨스턴 블롯이란?
‘웨스턴 블롯’은 샘플에서 특정 단백질을 감지하는 면역 블롯의 또 다른 이름입니다. 그러나 '서부 블롯'이라는 용어는 1981 년 W. Neal Burnette가 DNA의 시조 남부 블롯 이후에 만들어졌습니다. 한편, 남부 블롯은 영국 생물 학자 Edwin Southern에 의해 막 블롯의 특정 DNA 서열을 감지하기 위해 개발되었습니다. 또한 'Northern Blot'은 1977 년 Stanford University의 James Alwine, David Kemp 및 George Stark가 Gerhard Heinrich의 공헌으로 개발 한 RNA를 탐지하는 기술입니다.
면역 블롯과 웨스턴 블롯의 차이
- 면역 블롯과 웨스턴 블롯 사이에는 큰 차이가 없습니다. 그러나, 면역 블롯은 샘플에서 단백질 검출을위한 항체의 사용으로 인해이 기술의 더 정확한 이름이다.
결론
면역 블롯은 분자 생물학의 기술입니다. 따라서, 검출 목적에 대한 항체의 사용으로 인해이 기술의보다 올바른 이름은 면역 블롯이다. 그러나 남부 블롯 인 반대 기술을 나타내는 데있어서 '웨스턴 블롯'이라고도합니다. 과정과 관련하여, 면역 블롯은 겔상의 변성 단백질의 크기 분리와 결과 단편을 막으로 옮긴다. 마지막으로, 표지 된 항체는 막상의 특정 단백질에 결합한다. 따라서이 설명에 기초하여 원칙, 방법론 또는 응용 측면에서 면역 블롯과 웨스턴 블롯 사이에는 유의 한 차이가 없습니다.
참조 :
1. Gavini K, Parameshwaran K. Western Blot (단백질 면역 블롯) [2019 년 6 월 7 일 업데이트]. 에서 :Statpearls [인터넷]. Treasure Island (FL) :Statpearls Publishing; 2019 년 1 월. 여기에서 사용할 수 있습니다.
이미지 제공 :
1. Timvickers의“항 리포 산 면역 블롯”-Commons Wikimedia
2를 통한 자신의 작업 (CC By-SA 3.0). Commons Wikimedia
3을 통해 English Wikipedia (CC x 3.0)의 Bensaccount에 의한 "SDS-PAGE Electrophoresis". Commons Wikimedia
4를 통해 English Wikipedia (CC x 3.0)의 Bensaccount에 의한 "Western Blot Transfer". Commons Wikimedia
5를 통해 English Wikipedia (CC x 3.0)의 Bensaccount에 의한 "Western Blot Binding". Commons Wikimedia를 통해 영어 Wikipedia (CC x 3.0)의 Bensaccount에 의한 "Western Blot Chemiluminescent Detection"
