1. 항생제 내성 마커 :
* 원리 : 이 방법은 원하는 유전자와 함께 벡터에 항생제 내성 유전자를 삽입하는 데 의존합니다. 재조합 벡터를 성공적으로 수행하는 세포는 또한 특정 항생제에 대한 내성을 얻을 것이다.
* 절차 : 세포는 항생제를 함유하는 배지에서 성장시킨다. 재조합 벡터를 취하고 저항성 유전자를 발현하는 세포만이 살아남아 식민지를 형성합니다.
* 예 : 일반적으로 사용되는 암피실린 저항성 유전자 (AMPR)는 아피실린의 존재하에 박테리아가 생존 할 수있게한다.
2. 리포터 유전자 :
* 원리 : 리포터 유전자는 검출 가능한 신호를 생성하는 단백질을 암호화하여 재조합 DNA를 함유하는 세포를 쉽게 확인할 수 있습니다.
* 절차 : 리포터 유전자는 종종 원하는 유전자와 관련이 있으므로 리포터 유전자의 발현은 재조합 DNA의 성공적인 삽입을 나타낸다.
* 예 :
* lacz 유전자 : 베타-갈 락토시다 제를 암호화하여 기판 (x-gal)을 분해하여 파란색을 생성합니다.
* GFP 유전자 : 녹색 형광 단백질을 암호화하여 세포가 자외선에서 녹색으로 빛납니다.
3. 색상 선택 :
* 원리 : 이 방법은 재조합 DNA의 존재가 세포의 색상을 변화시키는 유전자 시스템을 사용합니다.
* 절차 : 재조합 DNA를 함유하는 세포는 세포가없는 세포에 비해 다른 색을 나타냅니다.
* 예 : 청색-흰색 스크리닝 방법은 재조합 DNA에 대한 삽입 부위에 의해 파괴 된 Lacz 유전자를 갖는 벡터를 사용한다. 재조합 DNA를 갖는 세포는 백색 콜로니를 생성하는 반면, 그것없는 세포는 푸른 식민지를 생성 할 것이다.
4. 보완 :
* 원리 : 이 방법은 세포가 특정 생성물에서 생존하거나 생산하기 위해 원하는 유전자가 필요할 때 사용됩니다.
* 절차 : 기능성 유전자가없는 세포는 유전자를 함유하는 재조합 벡터로 형질 전환된다. 기능성 유전자를 갖는 세포만이 원하는 생성물에서 생존하거나 생성 할 것이다.
* 예 : 특정 효소가없는 박테리아의 균주는 효소를 암호화하는 유전자를 함유하는 벡터로 형질 전환 될 수있다. 변형 된 박테리아만이 생존하고 자랄 수 있습니다.
5. 형광 활성화 된 세포 분류 (FACS) :
* 원리 : FACS는 형광 표지를 사용하여 특정 특성에 따라 세포를 식별하고 정렬합니다.
* 절차 : 원하는 유전자 (형광 마커에 연결된)를 발현하는 세포는 형광 특성에 기초하여 나머지와 분류된다.
* 장점 : 고 처리량 스크리닝, 정확한 분리 및 효율적인 세포 분류.
6. PCR 스크리닝 :
* 원리 : PCR은 재조합 DNA의 존재를 확인하여 특정 DNA 서열을 증폭시키는 데 사용될 수있다.
* 절차 : DNA는 세포로부터 추출하고 삽입 된 유전자에 특이적인 프라이머를 사용하여 증폭된다. 증폭 된 생성물의 존재는 성공적인 삽입을 나타냅니다.
선택 방법의 선택은 특정 실험, 사용 된 벡터 및 원하는 결과에 따라 다릅니다.
