1. 특정 인식 사이트 :
II 형 제한 효소는 palindromic 서열에서 DNA를 인식하고 절단한다 - 반대 가닥에서 동일한 뒤쪽 및 앞면을 읽는 시퀀스. 이 특이성은 특정 위치에서 DNA의 정확한 절단을 허용하며, 유전자를 벡터에 삽입하는 데 중요합니다.
2. 정의 된 절단 패턴 :
그들은 전형적으로 특정 위치에서 DNA를 자릅니다 인식 순서 내에서 다음 중 하나를 초래합니다.
* 무딘 끝 : 두 가닥 모두 똑바로 잘라서 둔기가 남습니다.
* 끈적 끈적한 끝 : 효소는 가닥을 고르지 않게 자르고 보완적인 단일 가닥 돌출부 ( "스티커 엔드")를 만듭니다.
3. 예측 가능성 :
예측 가능한 절단 패턴을 통해 연구자들은 다음을 수행 할 수 있습니다.
* 원하는 위치에서 DNA를 자릅니다 유전자 분리 및 삽입 용.
* 호환 끝을 생성 다른 소스의 DNA 조각에 결합합니다.
4. 가용성 :
다양한 유형 II 제한 효소의 광범위한 배열이 확인되고 특성화되어 광범위한 인식 서열 및 절단 패턴을 제공하여 유전자 클로닝 전략에 대한 유연성을 제공합니다.
유전자 클로닝에서 II 형 제한 효소가 사용되는 방법 :
1. 유전자 분리 : 표적 유전자는 유전자 내의 부위에서 절단되는 특정 제한 효소를 사용하여 공여체 유기체로부터 분리된다.
2. 벡터 준비 : 적합한 벡터 (예를 들어, 플라스미드, 파지)는 동일한 제한 효소로 절단되어 호환 가능한 끝을 만듭니다.
3. 결찰 : 분리 된 유전자 단편 및 선형화 된 벡터는 DNA 리가 제를 사용하여 함께 결찰되어 끈적 끈적한 끝에서 DNA 단편을 결합시킨다.
4. 변형 : 재조합 벡터는 숙주 세포 (예를 들어, 박테리아)에 도입되어 삽입 된 유전자를 복제하고 발현시킨다.
요약 : II 형 제한 효소는 유전자 클로닝에 필수 불가결합니다.
* 특이성 : 특정 DNA 서열에서의 정확한 절단.
* 예측 가능성 : 예측 가능한 결과를위한 일관된 절단 패턴.
* 가용성 : 다양한 응용을위한 광범위한 효소.
그들은 DNA의 제어 된 조작을 촉진하여 새로운 숙주에서 외래 유전자의 삽입 및 발현을 가능하게하여 현대 생명 공학의 기초를 형성한다.
