1. 항생제 내성에 의한 선택 :
* 작동 방식 : 대부분의 플라스미드는 항생제 내성 유전자를 가지고 있습니다. 플라스미드로 박테리아를 변형시킬 때, 플라스미드를 차지한 박테리아 만 항생제를 함유 한 배지에서 살아남을 것입니다.
* 예 : 일반적인 항생제 내성 유전자는 암피실린 저항성 (AMPR)입니다. 플라스미드에 AMPR 유전자가 포함되어 있으면 박테리아가 암피실린을 함유 한 배지에 배출 할 수 있습니다. 플라스미드가있는 박테리아 만 자라지 만, 그없는 사람은 죽을 것입니다.
2. 흑백 스크리닝 :
* 작동 방식 : 이 방법은 LACZ 유전자를 사용합니다. Lacz 유전자는 기질을 분해하여 파란색을 생성하는 효소를 코딩합니다. 플라스미드는 파괴 된 Lacz 유전자의 사본을 함유 할 것이다 (비활성화). 재조합 플라스미드는 관심 유전자의 삽입에 의해 Lacz 유전자가 중단 될 것이다. 비 재전송 플라스미드로 형질 전환 된 박테리아는 효소를 생성하고 기질을 함유하는 배지에서 청색으로 나타나는 반면, 재조합 플라스미드로 형질 전환 된 박테리아는 효소를 생성하지 않고 흰색으로 나타납니다.
* 장점 : 이 방법을 사용하면 재조합을 빠르고 쉽게 식별 할 수 있습니다.
* 참고 : 이 방법은 "LACZ 벡터"라고 불리는 특정 유형의 플라스미드가 필요합니다.
3. 식민지 PCR :
* 작동 방식 : 이 방법은 박테리아의 콜로니에서 PCR을 수행하여 재조합 플라스미드에 존재하지만 원래 플라스미드에는 존재하지 않는 특정 DNA 단편을 증폭시키는 것을 포함한다.
* 장점 : 이 방법은 매우 구체적이며 삽입 된 유전자의 존재를 확인할 수 있습니다.
* 참고 : 이 방법은 관심 유전자 및 PCR 열시 클러에 대한 특정 프라이머가 필요합니다.
4. 제한 효소 소화 :
* 작동 방식 : 이 방법은 특정 제한 효소로 플라스미드 DNA를 소화하는 것을 포함한다. 재조합 플라스미드는 삽입 된 유전자로 인해 원래 플라스미드와 비교하여 상이한 제한 패턴을 가질 것이다.
* 장점 : 이 방법은 삽입 된 유전자의 존재와 그 방향을 확인할 수 있습니다.
* 참고 : 이 방법은 플라스미드의 제한 부위와 관심 유전자에 대한 지식이 필요합니다.
5. 형광 마커 :
* 작동 방식 : 일부 플라스미드는 형광 현미경 하에서 형질 전환 된 세포를 확인하는데 사용될 수있는 형광 단백질 (GFP와 같은)을 함유한다.
* 장점 : 이 방법은 매우 시각적이며 형질 전환 된 세포를 쉽게 식별 할 수 있습니다.
* 참고 : 이 방법에는 형광 필터가있는 현미경이 필요합니다.
6. 웨스턴 블 롯팅 :
* 작동 방식 : 이 방법은 관심 유전자의 단백질 생성물을 검출하는 데 사용될 수 있습니다.
* 장점 : 이 방법은 유전자가 성공적으로 복제되고 발현되었음을 확인할 수 있습니다.
* 참고 : 이 방법은 관심있는 단백질에 특이적인 항체가 필요합니다.
재조합 세포를 식별하는 가장 좋은 방법은 특정 플라스미드 및 관심 유전자에 의존 할 것이다. 방법 조합을 사용하여 가장 정확한 결과를 보장 할 수 있습니다.
