rnases 란 무엇입니까?
RNases는 RNA를 분해하는 효소이다. 그것들은 어디에나 있으며, 이는 다음을 포함하여 거의 모든 생물학적 샘플에서 발견된다는 것을 의미합니다.
* 세포 : 세포 자체와 표면에.
* 장비 : 유리 제품 및 솔루션과 같은 실험실 장비.
* 공기 : 공중 RNases는 샘플을 오염시킬 수 있습니다.
RNA 불 활성화가 RNA 분리에 중요한 이유는 무엇입니까?
* RNA 무결성 보존 : RNases는 RNA를 신속하게 분해 할 수 있으므로 다운 스트림 응용 분야에 대한 고품질 RNA를 얻을 수 없습니다.
* 정확한 결과 : 저하 된 RNA는 유전자 발현 분석, 마이크로 어레이 또는 시퀀싱과 같은 실험에서 거짓 또는 오도 결과를 초래할 수있다.
DEPC의 작동 방식 :
DEPC는 RNase의 활성 부위와 반응하여 구조를 수정하고 비활성화합니다. 이 과정은 알킬화 로 알려져 있습니다 .
RNA 분리에서 DEPC를 사용하는 방법 :
1. 물을 DEPC로 처리하십시오 : DEPC는 전형적으로 물에 첨가 된 후, RNases의 완전한 불 활성화를 보장하기 위해 37 ℃에서 몇 시간 동안 인큐베이션된다. 그런 다음 DEPC를 자동으로 클래브하여 잔류 DEPC를 제거하여 RNase가없는 물만 남깁니다.
2. 솔루션 및 장비를 처리 : DEPC는 유리 제품, 피펫 팁 및 튜브와 같은 다른 솔루션 및 실험실 장비를 처리하여 RNase 오염을 제거하는 데 사용될 수 있습니다.
3. DEPC- 처리 시약 사용 : 많은 RNA 분리 키트 및 시약은 RNASE가없는 조건을 보장하기 위해 DEPC로 사전 처리됩니다.
중요한 메모 :
* 주의 : DEPC는 독성이 있으며주의해서 다루어야합니다. 적절한 개인 보호 장비를 착용하고 환기가 잘되는 지역에서 작업하십시오.
* 대안 : RNase 억제제 사용 또는 시판되는 RNase-free 시약을 사용하는 것과 같은 DEPC 처리에 대한 대안이 존재한다.
* 일관성의 중요성 : RNA 분리 과정 전체에 걸쳐 일관되게 DEPC 또는 다른 RNASE 불 활성화 방법을 사용하는 것은 RNA 완전성을 유지하는 데 중요합니다.
DEPC 처리를 통해 RNases를 효과적으로 비활성화함으로써, 연구원들은 고품질 RNA의 분리를 보장 할 수 있으며, 이는 정확하고 신뢰할 수있는 실험 결과에 필수적이다.
