1. 세포 용해 :
* 파괴 : 이 단계는 DNA를 방출하기 위해 세포를 열어 놓는 것과 관련이 있습니다. 이것은 세포 유형에 따라 다양한 방법으로 달성 할 수 있습니다.
* 물리적 혼란 : 연삭, 혼합 또는 초음파 처리와 같은 기계적 방법은 식물 또는 동물 세포에 사용될 수 있습니다.
* 화학 용해 : 리소자임과 같은 세제 및 효소는 세포막과 벽을 분해 할 수 있습니다.
* 세포 잔해 제거 : 방출 된 DNA는 다른 세포 성분과 혼합된다. 원심 분리는 DNA를 파편으로부터 분리하는데 사용되며, 상청액을 함유 한 DNA를 남긴다.
2. DNA 강수량 :
* 소금 추가 : 높은 염 농도는 DNA 골격의 음전 전하를 중화시켜 용액에서 침전 할 수 있도록 도와줍니다.
* 알코올 추가 : 에탄올 또는 이소프로 파놀을 용액에 첨가하여 DNA의 용해도를 감소시키고이를 용액에서 침전시킨다.
3. DNA 분리 :
* 원심 분리 : 침전 된 DNA는 원심 분리에 의해 수집된다. DNA는 튜브 바닥에 펠렛을 형성합니다.
* 세척 : 펠렛을 완충제로 세척하여 염과 단백질과 같은 불순물을 제거합니다.
4. DNA 정제 :
* 효소 소화 : RNase와 같은 효소는 RNA 오염을 제거하는 데 사용될 수 있습니다.
* 컬럼 크로마토 그래피 : 이 기술은 크기, 전하 또는 결합 친화력에 기초하여 DNA를 다른 분자와 분리시킨다.
5. DNA 정량화 :
* 분광 광도계 : DNA의 농도는 특정 파장 (260 nm)에서의 흡광도에 의해 측정된다.
* 형광 측정 : 형광 염료는 DNA에 결합하고 빛을 방출하여 정량을 허용합니다.
6. DNA 저장 :
* 동결 : 분리 된 DNA는 장기 저장을 위해 -20 ℃ 또는 -80 ℃에서 저장 될 수있다.
DNA 분리를위한 일반적인 기술 :
* 페놀 클로로포름 추출 : 유기 용매를 사용하여 DNA를 단백질로부터 분리하는 고전적인 방법.
* 소금에 절개 : 소금을 사용하여 DNA를 침전시키는 더 간단한 방법.
* 스핀 컬럼 : 막을 사용하여 DNA에 결합하고 불순물을 제거하는 편리한 키트.
* 자기 구슬 기반 분리 : DNA- 결합제로 코팅 된 자기 비드를 사용하여 DNA를 분리합니다.
이러한 기술을 통해 과학자들은 다양한 공급원으로부터 순수한 DNA를 얻을 수있어 유전자 클로닝, DNA 시퀀싱 및 유전자 시험을 포함한 광범위한 분자 생물학 연구를 수행 할 수 있습니다.
