1. 박테리아 준비 :
* 박테리아는 특정 성장 단계 (일반적으로 로그 단계)에 도달 할 때까지 영양이 풍부한 배지에서 자랍니다.
*이어서 세포는 염화 칼슘 (CACL2) 로 처리됩니다. . 이 처리는 박테리아 세포막을 더 투과성으로 만들어 DNA 흡수 가능성을 증가시킵니다.
2. 플라스미드 소개 :
* 재조합 플라스미드 DNA는 처리 된 박테리아와 혼합된다.
*이 혼합물은 열 충격 에 적용됩니다. (보통 42 ° C 짧은 시간). 이 열 충격은 막 투과성을 추가로 증가시키고 플라스미드가 박테리아 세포로 들어가도록 허용한다.
3. 변형 된 박테리아의 선택 :
* 모든 박테리아가 플라스미드 DNA를 차지하지는 않습니다. 형질 전환 된 박테리아를 확인하기 위해, 플라스미드는 선택 가능한 마커 유전자 를 함유한다. . 이 유전자는 일반적으로 항생제 내성을 부여합니다.
* 박테리아는 상응하는 항생제를 포함하는 성장 배지에 도금됩니다. 플라스미드를 취하고 항생제 내성 유전자를 발현 한 박테리아만이 자랄 수 있습니다.
4. 플라스미드 통합의 확인 :
* 박테리아가 재조합 플라스미드를 성공적으로 통합했음을 확인하기 위해 추가 분석이 일반적으로 수행됩니다. 여기에는 다음이 포함될 수 있습니다.
* pcr : 플라스미드로부터 특정 유전자 단편을 증폭시켜 그 존재를 확인한다.
* 제한 효소 소화 : 원하는 유전자 삽입물의 존재를 확인하기 위해 특정 효소로 플라스미드 DNA를 절단합니다.
* 시퀀싱 : 유전자의 올바른 삽입을 확인하기 위해 플라스미드 DNA의 서열을 결정한다.
전반적으로, 형질 전환은 박테리아에 재조합 플라스미드를 도입하는 매우 효율적인 방법이다. 변형 된 박테리아를 선택하고 플라스미드의 존재를 확인함으로써, 연구자들은 원하는 유전자 변형이 성공적으로 달성되었음을 보장 할 수 있습니다.
참고 : 전기 천공 와 같은 박테리아에 DNA를 도입하는 다른 방법이 있습니다. 전기 펄스를 사용하여 세포막에 기공을 생성하고 형질 도입 바이러스를 사용하여 DNA를 운반합니다. 그러나 변환은 단순성과 효과로 인해 가장 널리 사용되는 기술로 남아 있습니다.
