1. 인간 유전자의 분리 :
* 유전자 식별 : 첫째, 특정 인간 관심 유전자를 확인해야합니다. 여기에는 유전자의 기능, 염색체의 위치 또는 서열을 이해하는 것이 포함될 수 있습니다.
* 유전자 추출 : 이어서 유전자는 인간 세포로부터 추출되며, 종종 유전자의 DNA 서열을 증폭시키기 위해 PCR (중합 효소 연쇄 반응)과 같은 기술을 사용하여 추출된다.
2. 플라스미드 벡터의 제조 :
* 플라스미드 선택 : 적절한 플라스미드 벡터가 선택됩니다. 플라스미드는 박테리아에서 자연적으로 발견되는 작고 원형 DNA 분자입니다. 그들은 다음을 포함하여 유전자 클로닝에 유용하게 만드는 특정 기능을 가지고 있습니다.
* 복제 기원 : 플라스미드가 숙주 세포 내에서 독립적으로 복제 할 수있게한다.
* 항생제 내성 유전자 : 플라스미드를 성공적으로 채택한 박테리아를 선택하는 데 사용됩니다.
* 다중 클로닝 사이트 (MCS) : 여러 제한 효소 인식 부위를 갖는 영역으로, 외래 DNA를 쉽게 삽입 할 수 있습니다.
* 제한 효소 소화 : 플라스미드는 특정 제한 효소를 사용하여 MC에서 열려 있으며, 이는 인간 유전자의 끈적 끈적한 끝과 호환되는 끈적 끈적한 끝을 만듭니다.
3. 플라스미드에 유전자 삽입 :
* 결찰 : 단리 된 인간 유전자 및 선형화 된 플라스미드는 DNA 단편의 끝을 결합하는 효소 인 DNA 리가 제와 혼합된다. 이것은 인간 유전자를 함유하는 재조합 플라스미드를 만듭니다.
4. 변형 :
* 재조합 플라스미드를 박테리아에 도입 : 재조합 플라스미드는 일반적으로 변형이라는 과정을 사용하여 박테리아에 도입된다. 이것은 박테리아 세포를 일시적으로 DNA에 투과 할 수있게하는 것을 포함한다.
* 변형 된 박테리아의 선택 : 재조합 플라스미드를 성공적으로 취한 박테리아는 플라스미드의 항생제 내성 유전자를 사용하여 선택됩니다. 플라스미드를 함유하는 박테리아 만 항생제 함유 플레이트에서 생존 할 것이다.
5. 인간 유전자의 발현 :
* 복제 및 전사 : 재조합 플라스미드는 박테리아 내부를 복제하여 인간 유전자의 많은 사본을 생성합니다. 그런 다음 박테리아 기계는 유전자를 mRNA로 전사합니다.
* 번역 및 단백질 생산 : mRNA는 상응하는 단백질로 번역 된 후 분리되고 정제 될 수있다.
재조합 DNA 기술의 적용 :
이 과정은 다음을 포함하여 다양한 분야에 혁명을 일으켰습니다.
* 의학 : 인슐린, 성장 호르몬 및 응고 인자와 같은 치료 단백질의 생산.
* 농업 : 강화 된 특성을 가진 유전자 변형 작물의 개발.
* 연구 : 유전자 기능 및 새로운 진단 도구의 개발.
참고 : 이것은 단순화 된 개요입니다. 실제 과정에는 특정 유전자 및 적용에 따라 많은 상세한 단계와 기술이 포함됩니다.
