리포터 효소 :변환을 모니터링하기위한 강력한 도구
리포터 효소는 숙주 세포에서 유전자 형질 전환의 성공을 모니터링하는 데 유용한 도구이며, 전통적인 선택 가능한 마커에 대한 보완적인 접근법을 제공합니다. 그들이 작동하는 방법은 다음과 같습니다.
1. 리포터 유전자 통합 :
* 특이 적 효소 (예를 들어, β- 갈 락토시다 제, 루시퍼 라제 또는 녹색 형광 단백질)를 암호화하는 리포터 유전자는 관심있는 외래 DNA와 관련이있다.
*이 유전자는 외래 DNA와 함께 숙주 세포에서 발현되도록 설계되었습니다.
2. 리포터 효소 활성 :
* 숙주 세포에서 발현 될 때 리포터 효소는 쉽게 감지 가능한 신호를 생성하는 특정 반응을 촉진시킨다. 이것은 다음과 같습니다.
* 색상 변화 : X-Gal 기판에서 작용할 때 β- 갈 락토시다 제에 의해 생성 된 청색과 같습니다.
* 발광 : 기질의 존재하에 루시퍼 라제에 의한 빛의 생성에서 볼 수 있듯이.
* 형광 : UV 광으로 조명 될 때 녹색 형광 단백질 (GFP)에 의해 나타나는 녹색 형광처럼.
3. 변환 시각화 :
* 리포터 유전자를 발현하는 세포는 특징적인 신호를 표시하여 형질 전환 된 세포의 쉽게 식별하고 정량화 할 수 있습니다.
*이 신호는 현미경 (형광 또는 색상 변화) 또는 발광 계 (발광)에서 관찰 할 수 있습니다.
선택 가능한 마커에 비해 리포터 효소의 장점 :
* 더 빠르고 쉬운 스크리닝 : 리포터 효소 분석은 항생제 내성을 포함하는 전통적인 선택 방법보다 종종 더 빠르고 단순합니다.
* 정량 분석 : 리포터 효소는 유전자 발현 수준의 정량적 측정을 허용하여 형질 전환 효율에 대한 통찰력을 제공합니다.
* 비파괴 : 변환되지 않은 세포를 죽이는 선택 방법과 달리, 리포터 효소 분석은 비파괴 적이며, 형질 전환 된 세포의 추가 분석을 가능하게한다.
리포터 효소 및 그 응용의 예 :
* β- 갈 락토시다 아제 : 대장균에서 클로닝을 위해 파란색/흰색 스크리닝 시스템과 함께 사용되는 LACZ 유전자를 함유하는 형질 전환 세포를 식별하는 데 일반적으로 사용됩니다.
* 루시퍼 라제 : 유전자 발현을 측정하고 다양한 유기체에서 프로모터 활성을 모니터링하는 데 사용됩니다.
* 녹색 형광 단백질 (GFP) : 살아있는 세포에서 유전자 발현 및 단백질 위치를 시각화하기위한 다목적 리포터.
결론 :
리포터 효소는 숙주 세포에서 형질 전환 효율 및 유전자 발현을 모니터링하기위한 강력한 도구를 제공한다. 그들은 전통적인 선택 가능한 마커에 대한 빠르고 민감하며 비파괴적인 대안을 제공하여 유전자 조작에 대한 더 깊은 이해에 기여합니다.
