과정 이해
* 추출 : Xanthophyll은 에탄올을 사용하여 소스 재료 (예 :식물 잎)에서 추출됩니다.
* 분광 광도계 : 에탄올 용액에서 크 산토 필의 농도는 분광 광도계를 사용하여 결정된다. 크 산토 필은 특정 파장에서 빛을 흡수하고 흡수 된 빛의 양은 농도에 비례합니다.
방법
Xanthophyll 농도를 계산하는 두 가지 일반적인 방법은 다음과 같습니다.
1. 표준 곡선 사용
* 표준 솔루션 준비 : 순수한 Xanthophyll 표준을 얻으십시오. 알려진 농도의 스톡 용액을 생성하기 위해 에탄올에 알려진 표준 중량을 용해시킨다.
* 표준 곡선 생성 : 스톡 용액을 희석하여 알려진 농도 (예 :10, 20, 30, 40, 50 µg/ml)를 갖는 일련의 용액을 생성하십시오.
* 흡광도 측정 : 분광 광도계를 사용하여 크 산토 필 (일반적으로 약 440-450 nm)의 최대 흡광도 파장에서 각 표준 용액의 흡광도를 측정하십시오.
* 표준 곡선을 플로팅하십시오 : y 축의 흡광도 값과 x 축의 해당 농도를 플로팅하십시오. 이것은 흡광도와 농도 사이의 선형 관계를 만듭니다.
* 알 수없는 샘플 측정 : 같은 파장에서 분광 광도계를 통해 추출 된 Xanthophyll 샘플을 실행하십시오. 측정 된 흡광도에 따라 표준 곡선에서 해당 농도를 찾으십시오.
2. Beer-Lambert Law 사용
* Beer-Lambert 법 : 이 법률은 흡광도 (a)는 분석 물의 농도 (c)와 용액을 통한 광선의 경로 길이 (L)에 직접 비례한다고 명시하고있다. 방정식은 다음과 같습니다.
* 어금니 흡수성 (ε) : 이 값은 일반적으로 문헌에서 제공되거나 표준 솔루션을 사용하여 실험적으로 결정될 수 있습니다.
* 흡광도 측정 : 최대 흡광도 파장에서 추출 된 Xanthophyll 샘플의 흡광도를 측정하십시오.
* 농도 계산 : Beer-Lambert Law 방정식을 재배치하여 집중력을 해결하십시오 :C =A / (εl).
고려 사항 :
* 추출 효율 : 추출 프로세스가 효율적이고 모든 Xanthophyll이 소스 자료에서 추출되었는지 확인하십시오.
* 용매 순도 : 불순물의 간섭을 피하기 위해 고품질 에탄올을 사용하십시오.
* 교정 : 정확한 결과를 보장하기 위해 측정하기 전에 항상 분광 광도계를 보정하십시오.
* 파장 선택 : Xanthophyll (보통 약 440-450 nm)의 최대 흡광도를 위해 올바른 파장을 선택하십시오.
* 간섭 화합물 : 샘플의 다른 안료는 유사한 파장에서 흡수 될 수 있습니다. 필요한 경우 Xanthophyll을 이러한 간섭 화합물과 분리하는 방법을 사용하십시오.
예제 계산 :
450 nm에서 0.500의 흡광도를 가진 에탄올에 Xanthophyll 추출물이 있다고 가정 해 봅시다. 450 nm에서 Xanthophyll의 몰 흡수율 (ε)은 25,000 m⁻¹cm⁻¹이고 Cuvette의 경로 길이 (L)는 1 cm입니다.
Beer-Lambert 법률 사용 :
c =a / (εl)
C =0.500 / (25,000 m⁻¹cm⁻¹ × 1 cm)
C =2.0 × 10 ℃ (또는 20 µm)
중요한 참고 : 이것은 단순화 된 예입니다. 특정 방법과 계산은 특정 상황과 사용중인 장비에 따라 다릅니다. 정확한 결과를 얻으려면 항상 관련 문헌 및 프로토콜을 참조하십시오.
