기본 이해
* 인산 나트륨 완충액 : 이 완충액은 전형적으로 단 모노 바스 산 나트륨 포스페이트 (NAH2PO4) 및이 바이 바스 인산 나트륨 (NA2HPO4)의 혼합물을 사용하여 만들어진다. 이들 두 성분은 컨쥬 게이트 산-염기 쌍으로서 작용하여 용액이 pH의 변화에 저항 할 수 있도록 허용한다.
* pH 6.9 : 버퍼의 원하는 pH. 이것은 NAH2PO4 대 NA2HPO4의 비율을 결정합니다.
* 0.006 M NaCl : 이것은 단순히 버퍼에 첨가 된 소금 용액입니다. 버퍼의 pH에 직접 영향을 미치지 않지만 특정 실험 요구에 사용될 수 있습니다.
버퍼를 준비하는 단계
1. 필요한 덩어리를 계산합니다 :
* PKA를 결정하십시오 : 포스페이트 완충액에 대한 관련 PKA는 7.21 (H2PO4- / HPO42- 평형의 PKA)이다. 이것은 원하는 pH에 가깝기 때문에 좋은 선택입니다.
* Henderson-Hasselbalch 방정식 :
* pH =pka + log ([HPO42-] / [H2PO4-])
* 6.9 =7.21 + 로그 ([HPO42-] / [H2PO4-])
* 비율에 대한 해결 :[HPO42-] / [H2PO4-] =0.50
* 각 인산염 성분의 몰토리를 계산합니다 :
* 총 포스페이트 몰비리티 =0.02 m
* [NA2HPO4] =0.02 m * (0.50 / 1.50) =0.0067 m (대략)
* [NAH2PO4] =0.02 m * (1.00 / 1.50) =0.0133 m (대략)
* 어금니를 그램으로 변환 :
* NAH2PO4 (119.98 g/mol) 및 NA2HPO4 (141.96 g/mol)의 분자량이 필요합니다.
* 다음 공식을 사용하여 각 구성 요소에 필요한 질량을 계산하십시오. 질량 =(Molarity * 부피 * 분자량) / 1000
예를 들어, NAH2PO4의 경우 1 L의 버퍼를 만들려면 :
* 질량 =(0.0133 mol/l * 1 l * 119.98 g/mol)/1000 =1.59 g
* NA2HPO4의 질량을 유사하게 계산하십시오.
2. 물에 소금을 녹인다 :
* 계산 된 NAH2PO4 및 NA2HPO4의 양을 계량하십시오.
* 약 800ml의 증류수에 녹입니다.
* 계산 된 NaCl의 질량을 용액에 추가하고 저어 용해시킵니다.
* 자기 교반기 또는 교반 막대를 사용하여 철저한 혼합을 보장하십시오.
3. pH (선택 사항) :
* pH 미터를 사용하여 용액의 pH를 확인하십시오.
* pH가 정확히 6.9가 아닌 경우 소량의 1 M HCL (pH를 낮추기 위해) 또는 1 M NAOH (pH를 높이기 위해)를 추가하여 약간 조정할 수 있습니다. 미터로 pH를 모니터링하는 동안 이러한 솔루션을 드롭으로 추가하십시오.
4. 솔루션을 최종 볼륨으로 가져옵니다 :
* pH가 조정되면 증류수를 조심스럽게 첨가하여 용액의 총 부피를 1 L로 가져옵니다.
5. 점검 및 저장 :
* PH가 올바른지 확인하기 위해 한 번 더 확인하십시오.
* 더 긴 보관을 위해 버퍼를 실온 또는 냉장고에 보관하십시오.
중요한 고려 사항
* 물의 질 : 최상의 결과를 얻으려면 고품질 증류수를 사용하십시오.
* 정확도 : 올바른 완충액 농도를 보장하기 위해 염의 무게를 정확하게 무게를 when습니다.
* pH 미터 교정 : 정확한 측정을 위해 사용하기 전에 ph 미터를 올바르게 교정하십시오.
* 안전 : 화학 물질을 처리 할 때 항상 적절한 안전 장비 (장갑, 고글)를 착용하십시오.
이 절차는 0.006m NaCl을 갖는 pH 6.9에서 0.02m 나트륨 포스페이트 완충액을 제공해야한다. 다른 볼륨의 버퍼를 만들어야하는 경우 볼륨과 계산을 조정해야합니다.
