1. 기본 특이 적 화학적 변형 :
* g (구아닌) : 디메틸 설페이트 (DMS)는 N7 위치에서 구아닌을 메틸화한다.
* a (아데닌) &g (구아닌) : 포름산은 아데닌과 구아닌을 모두 탈피시킨다.
* C (Cytosine) : 히드라진은 시토신 잔기에서 특이 적으로 절단됩니다.
* C (Cytosine) &T (Thymine) : 염의 존재하에 하이드라진 (예를 들어, NaCl)은 또한 티민 잔기에서 절단 될 것이다.
2. 절단 반응 :
* Piperidine : 이것은 가닥 절단의 핵심 시약입니다. 화학적 변형 후에는 변형 된 염기에서 DNA 골격을 파괴하기 위해 사용된다.
3. 기타 시약 :
* 버퍼 : 용액은 pH 및 이온 성 조건을 유지하기 위해 적절한 완충제를 사용하여 준비됩니다.
* 에탄올 : DNA 단편의 침전에 사용됩니다.
* 아크릴 아미드 겔 전기 영동 : 변형 된 DNA 단편은 폴리 아크릴 아미드 겔 전기 영동을 사용하여 크기에 의해 분리된다.
화학적 변형에 대한 핵심 사항 :
* 특정 반응 조건 : 각각의 화학 반응은 최대 효율과 최소 반응을 보장하기 위해 pH, 온도 및 시간의 특정 조건 하에서 수행된다.
* 제어 수정 : 반응은 DNA 샘플에서 작은 비율의 염기 만 수정하기 위해 신중하게 제어됩니다.
* 라벨링 : DNA 단편의 한쪽 끝에 전기 영동 동안 시각화를 위해 전형적으로 방사성 동위 원소 (예를 들어, 32p)로 표지된다.
Maxam-Gilbert 시퀀싱의 장점 :
* 높은 정확도와 해상도
* 긴 DNA 단편 시퀀싱에 유용합니다
단점 :
* Sanger 시퀀싱보다 더 복잡하고 시간이 많이 걸립니다
* 위험한 화학 물질의 취급이 필요합니다
* Sanger 시퀀싱과 같은보다 효율적인 방법의 개발로 인해 덜 일반적으로 사용됩니다.
각 화학적 변형에 대한 특정 반응 메커니즘에 대한 자세한 설명을 원한다면 알려주십시오!
