포도당 -6- 포스페이트 탈수소 효소 (G6PD) 분석의 원리는 G6PD에 의해 촉매 된 효소 반응에 기초한다. G6PD는 환원제 인 NADPH를 생성하는 대사 경로 인 펜 토스 포스페이트 경로에서 중요한 역할을하는 효소이다.
이 분석에서, G6PD는 NADP+를 전자 수용체로 사용하여 포도당 -6- 포스페이트 (G6P)의 산화를 6- 포스 포 글루코 네이트 (6-PG)로 촉매한다. 이 반응 동안, NADP+는 NADPH로 감소되며, 이는 340 nm에서 강한 흡광도를 나타낸다. 시간이 지남에 따라 340 nm에서 흡광도의 증가를 측정함으로써, G6PD의 효소 활성을 정량화 할 수있다.
G6PD 분석과 관련된 주요 단계는 다음과 같습니다.
1. 샘플 준비 : 세포 용 해물 또는 조직 균질 물과 같은 G6PD를 함유하는 샘플이 제조된다.
2. 반응 혼합물 : 반응 혼합물은 전형적으로 G6P, NADP+, 완충 용액 및 G6PD를 함유하는 샘플을 포함한다.
3. 인큐베이션 : 반응 혼합물을 특정 온도 및 pH에서 인큐베이션하여 효소 반응이 발생하도록 허용된다.
4. 분광 광도 측정 : 반응 혼합물의 흡광도는 분광 광도계를 사용하여 340 nm에서 측정된다. 이 흡광도 판독 값은 생산 된 NADPH의 양에 해당합니다.
5. 계산 : 시간이 지남에 따라 340 nm에서 흡광도의 변화는 G6PD의 효소 활성을 계산하는 데 사용됩니다. 이 계산은 NADPH의 멸종 계수와 반응 혼합물의 부피를 고려합니다.
6. 효소 활성의 단위 : G6PD 활성은 일반적으로 리터당 단위 (U/L) 또는 리터당 국제 단위 (IU/L)로 표현되며, 여기서 하나의 효소 활성은 지정된 분석 조건 하에서 분당 1 마이크로 몰의 NADPH를 생산하는 데 필요한 효소의 양을 나타낸다.
G6PD 활성의 측정은 G6PD의 결함이 G6PD 결핍으로 알려진 상태로 이어질 수 있기 때문에 임상 적 중요성을 갖습니다. 이는 특정 약물이나 물질에 노출 될 때 용혈성 빈혈을 유발합니다. G6PD 분석은 G6PD 결핍을 진단하고 상태를 가진 개인의 효소 활성을 모니터링하기 위해 수행됩니다.
