1. 인간 성장 호르몬 유전자를 얻으십시오
* 분리 : 인간 DNA로부터 HGH를 인코딩하는 유전자를 분리해야합니다. 이것은 일반적으로 PCR (중합 효소 연쇄 반응)과 같은 기술을 사용하여 수행됩니다.
* 합성 : 대안 적으로, 알려진 DNA 서열에 기초하여 유전자를 화학적으로 합성 할 수있다.
2. 효모 발현 벡터를 설계하고 구성합니다
* 벡터 선택 : 높은 수준의 단백질 발현에 적합한 효모 발현 벡터를 선택하십시오. 이 벡터는 종종 다음을 포함합니다.
* 프로모터 : HGH 유전자의 전사를 유도하는 강력한 프로모터.
* 터미네이터 : 전사의 끝을 신호하는 서열.
* 선택 마커 : 항생제에 대한 내성을 부여하는 유전자로 벡터를 함유하는 효모 세포를 선택할 수 있습니다.
* 다중 클로닝 사이트 (MCS) : HGH 유전자를 삽입 할 수있는 영역.
* hgh 유전자 삽입 : 선택한 벡터의 MC에 HGH 유전자를 삽입하십시오.
3. 효모 세포의 형질 전환
* 유능한 세포 : DNA (유능한 세포)를 복용 할 수있는 효모 세포를 준비하십시오.
* 변형 : 전기 천공 또는 리튬 아세테이트 형질 전환과 같은 방법을 사용하여 발현 벡터를 효모 세포로 도입하십시오.
* 선택 : 항생제 내성 마커를 사용하여 벡터를 성공적으로 통합 한 효모 세포를 선택하십시오.
4. 효모 세포를 배양
* 성장 조건 : 성장 및 HGH 생산을 지원하는 적절한 매체에서 형질 전환 효모 세포를 성장시킵니다.
* 조건 최적화 : HGH 수율을 최대화하기 위해 온도, pH 및 영양소 가용성과 같은 요인을 최적화하십시오.
5. 정제 및 특성화
* 수확 세포 : 충분한 성장 후 효모 세포를 수확하십시오.
* 용해 : 세포를 열어 HGH 단백질을 방출하십시오.
* 정제 : 크로마토 그래피와 같은 기술을 사용하여 HGH를 정제하여 불순물을 제거하고 집중적이고 순수한 제품을 얻습니다.
* 특성 : SDS-PAGE, 웨스턴 블 롯팅 및 생물학적 분석과 같은 기술을 사용하여 정제 된 HGH 단백질의 동일성 및 기능을 확인하십시오.
중요한 고려 사항 :
* 효모 스트레인 : 단백질 발현 및 분비에 적합한 효모 균주를 선택하십시오. 일부 균주는 다른 균주보다 많은 양의 단백질을 생산하는 것이 좋습니다.
* 번역 후 수정 : 효모가 항상 인간 세포로서 HGH와 동일한 번역 후 변형 (글리코 실화와 같은)을 만들 수는 없다. 이러한 수정은 HGH 활동에 중요 할 수 있습니다.
* 안전 및 규정 : 치료 목적으로 HGH를 생산하고 사용하려면 엄격한 안전 조치와 규제 승인이 필요합니다.
참고 : 이것은 프로세스에 대한 단순화 된 개요입니다. 효모에서 HGH의 실제 생산에는 많은 추가 복잡성과 최적화 단계가 포함됩니다.
이 과정은 단순화 된 예이며 적절한 훈련과 경험 없이는 시도해서는 안됩니다. 생명 공학 실험을 수행하기 전에 항상 자격을 갖춘 전문가와 상담하십시오.
