단백질로부터 유리 아미노산을 분리하는 방법
1. 가수 분해 :
* 산 가수 분해 : 가장 일반적인 방법. 강산 (예 :HCl)은 단백질의 펩티드 결합을 파괴하여 개별 아미노산을 방출하는 데 사용됩니다.
* 절차 :
* 단백질 샘플은 12-24 시간 동안 고온 (100-110 ° C)에서 농축 HCL (일반적으로 6M)으로 처리됩니다.
*이 과정은 모든 펩티드 결합을 절단하여 유리 아미노산을 방출합니다.
* 가수 분해 후, 산을 증발하여 제거하여 아미노산 혼합물을 남긴다.
* 장점 : 효과적이고 비교적 간단합니다.
* 단점 : 아미노산 분해, 특히 트립토판으로 이어질 수 있습니다. 시스테인과 같은 일부 아미노산은 파괴되거나 변형 될 수 있습니다.
* 효소 가수 분해 : 특정 효소 (예 :프로테아제)를 사용하여 단백질을 펩티드 및 궁극적으로 유리 아미노산으로 분해합니다.
* 절차 :
* 특정 효소는 단백질의 구조와 원하는 결과에 기초하여 선택됩니다.
* 최적 조건에서 효소와의 배양은 제어 된 분해를 허용한다.
* 장점 : 가벼운 조건, 덜 저하는 더 선택적 일 수 있습니다.
* 단점 : 산 가수 분해보다 더 비싸고 느릴 수 있습니다.
2. 분리 및 정제 :
* 크로마토 그래피 :
* 이온 교환 크로마토 그래피 : 전하에 따라 아미노산을 분리합니다.
* 크기 배제 크로마토 그래피 : 크기에 따라 아미노산을 분리합니다.
* 고성능 액체 크로마토 그래피 (HPLC) : 아미노산을 분리하고 정량화하기위한 매우 민감하고 정확한 방법.
* 전기 영동 : 전하 및 크기에 따라 아미노산을 분리합니다.
고려 사항 :
* 단백질 소스 : 당신이 시작하는 단백질의 유형은 최상의 방법에 영향을 미칩니다.
* 원하는 결과 : 당신은 단순히 유리 아미노산의 존재를 식별하려고합니까, 아니면 그것들을 정량화해야합니까?
* 감도 : 분석에 필요한 감도 수준.
* 비용 및 장비 : 사용 가능한 리소스를 고려하십시오.
일반 워크 플로 :
1. 단백질 준비 : 관심있는 단백질을 분리하고 정제합니다.
2. 가수 분해 : 적절한 가수 분해 방법 (산 또는 효소)을 선택하십시오.
3. 분리 및 정제 : 유리 아미노산을 분리하고 분리하는 방법을 선택하고 최적화하십시오.
4. 식별 및 정량화 : 크로마토 그래피, 전기 영동 또는 기타 분석 방법과 같은 기술을 사용하여 유리 아미노산을 식별하고 정량화합니다.
중요한 참고 : 단백질로부터 유리 아미노산을 분리하기위한 특정 절차 및 조건은 단백질 공급원, 원하는 결과 및 이용 가능한 자원에 따라 달라질 것이다.
