1. 인간 인슐린 유전자 분리 :
* 유전자 식별 : 연구원들은 먼저 인간 인슐린을 코딩하는 정확한 DNA 서열을 정확히 찾아야했다. 여기에는 인간 게놈을 연구하고 인슐린 단백질의 구조를 이해하는 것이 포함되었습니다.
* 유전자 클로닝 : 일단 유전자가 확인되면, 그들은 제한 효소 및 플라스미드와 같은 기술을 사용하여 인간 DNA로부터 인슐린 유전자를 절단하고 그것을 플라스미드라고 불리는 작은 원형 DNA 조각에 삽입 하였다. 이것은 재조합 DNA 분자를 만들었다.
2. 적절한 박테리아 숙주 선택 :
* e. 작업장으로서의 사상 : 박테리아 * 대장균 * (대장균)은 숙주 유기체로 선택되었다. 그것은 잘 연구되고 쉽게 조작되고 빠르게 재생되는 박테리아로 대규모 생산에 이상적입니다.
3. 유전자를 박테리아에 삽입 :
* 변형 : 인간 인슐린 유전자를 함유하는 재조합 플라스미드를 대장균 세포에 도입 하였다. 변형이라고 불리는이 과정은 박테리아가 플라스미드를 차지할 조건을 만드는 것이 포함되었습니다.
4. 트랜스 제닉 박테리아 선택 :
* 항생제 내성 : 플라스미드는 종종 항생제 내성을위한 유전자를 함유 하였다. 이를 통해 연구자들은 플라스미드를 성공적으로 수행 한 박테리아를 쉽게 식별 할 수있었습니다. 그들은 항생제의 존재하에 박테리아를 자랄 것이며, 플라스미드가있는 박테리아만이 살아 남았습니다.
5. 인슐린 유전자 발현 :
* 프로모터 및 규정 : 플라스미드는 인간 인슐린 유전자가 대장균 내부에서 발현 (켜진)하도록 설계되었다. 여기에는 박테리아 기계가 인슐린 유전자를 읽고 전사하도록 지시하는 DNA 영역 인 프로모터 서열을 포함하여 관련이 있습니다.
6. 인슐린 생산 및 정제 :
* 대규모 발효 : 형질 전환 대장균 박테리아는 큰 발효 탱크에서 성장하여 대량의 인슐린을 생산할 수있게 하였다.
* 정제 : 발효 후, 박테리아에 의해 생성 된 인슐린은 나머지 박테리아 성분들로부터 정제되어야했다. 여기에는 크로마토 그래피 및 여과와 같은 다양한 기술이 포함되었습니다.
중요한 참고 : 이것은 단순화 된 개요입니다. 이 과정에는 수많은 기술적 세부 사항, 반복 및 도전 과제가 포함되었으며 많은 훌륭한 과학자들이 성공에 기여했습니다.
