대장균의 내부 막 단백질 및 외막 단백질
내부 막 단백질 (IMPS) :이들 단백질은 세포질을 동봉하는 인지질 이중층 인 대장균의 내부 막 안에 내장된다. 그들은 다음을 포함하여 다양한 세포 기능에서 중요한 역할을합니다.
* 운송 : 막을 가로 지르는 영양소, 이온 및 폐기물의 움직임을 촉진합니다.
* 신호 변환 : 환경에서 셀 내부로의 신호 전달.
* 에너지 대사 : 전자 수송 및 ATP 합성과 같은 공정에 참여합니다.
외막 단백질 (OMPS) :이들 단백질은 내부 막을 둘러싸고 구조적지지 및 보호를 제공하는 제 2 인지질 이중층 인 대장균의 외막에 위치한다. 그들은 다음에 관여합니다.
* 포린 형성 : 소분자 통과를 허용하는 채널을 만듭니다.
* 수용체 활동 : 특정 분자에 결합하고 세포 반응을 유발합니다.
* 접착력 : 표면이나 다른 세포에 부착.
대장균에서 내부 및 외막 단백질 분리
이 단백질 유형을 대장균에서 분리하는 일반적인 접근법은 다음과 같습니다.
1. 세포 용해 :
* 기계 용해 : 초음파 처리 또는 프랑스 프레스와 같은 방법을 사용하여 세포벽을 방해하고 세포 내용물을 방출하십시오.
* 화학 용해 : Triton X-100 또는 SDS와 같은 세제를 사용하여 막 지질을 용해시킵니다.
2. 차동 원심 분리 :
* 저속 원심 분리 (10,000 x g) : 이 단계는 끊임없는 세포와 큰 세포 성분을 포함한 세포 잔해를 제거합니다.
* 고속 원심 분리 (100,000 x g) : 이 단계는 내부 및 외부 막을 가용성 세포질로부터 분리시킨다. 두 막을 함유하는 펠렛이 수집된다.
3. 막 분류 :
* 수 크로스 그라디언트 원심 분리 : 이 방법은 밀도에 따라 막을 분리합니다. 외막은 전형적으로 내부 막보다 밀도가 낮으므로 분리를 허용합니다.
* Triton X-114 위상 분할 : 이 기술은 비 이온 세제를 사용하여 소수성에 따라 단백질을 분리합니다. IMPS는 OMP보다 소수성이므로 세제가 풍부한 단계로 분할하게됩니다.
4. 정화 :
* 친 화성 크로마토 그래피 : 이 기술은 표적 단백질에 결합하는 특정 리간드를 사용하여 다른 단백질로부터의 분리를 허용한다.
* 이온 교환 크로마토 그래피 : 이 방법은 전하에 따라 단백질을 분리합니다.
* 크기 제외 크로마토 그래피 : 이 기술은 크기에 따라 단백질을 분리합니다.
5. 확인 :
* SDS-PAGE : 이 전기 영동 기술은 분자량에 따라 단백질을 분리합니다.
* 웨스턴 블 롯팅 : 이 기술은 항체를 사용하여 특정 단백질을 검출합니다.
중요한 메모 :
* 특정 프로토콜은 표적 단백질과 그 특성에 따라 다릅니다.
* 각 단계의 최적화는 순수하고 기능적인 단백질을 얻는 데 중요합니다.
* 질량 분석법과 같은 기술은 분리 된 단백질 분획의 추가 분석에 사용될 수 있습니다.
상업용 키트 :
대장균 내부 및 외부 막 단백질을 분리하기 위해 여러 상용 키트를 사용할 수 있으며, 이는 공정을 단순화 할 수 있습니다.
이러한 단계를 수행하고 적절한 기술을 선택함으로써, 연구자들은 대장균에서 내부 및 외부 막 단백질을 성공적으로 분리하고 정제하여 구조, 기능 및 상호 작용을 추가로 분석 할 수 있습니다.
