단일 세포 클론을 얻는 방법
1. 희석 클로닝 (제한 희석)
- 원칙 : 세포 현탁액을 개별 세포를 분리하고 개별 웰 또는 스팟으로 도금 할 수있는 충분한 농도로 희석합니다.
- 절차 :
- 1. 준비 : 혈구 계 또는 세포 카운터를 사용하여 배양의 대략적인 세포 농도를 결정하십시오.
- 2. 희석 : 원하는 세포 밀도를 달성하는 데 필요한 희석 계수 (예를 들어, 웰당 1 세포)를 계산합니다. 그에 따라 세포 서스펜션을 희석하십시오.
- 3. 도금 : 희석 된 세포를 다중 웰 플레이트 (96- 웰, 24- 웰 등) 또는 페트리 접시에 플레이트합니다.
- 4. 인큐베이션 : 세포가 성장하고 식민지를 형성하도록합니다.
- 5. 선택 : 단일 식민지가있는 우물 또는 영역을 식별하십시오 (하나의 세포는 전체 식민지를 일으켰습니다).
2. 미세 조작 (미세한 선택)
- 원칙 : 현미경과 미세 조작기를 사용하여 단일 세포를 물리적으로 픽업하고 새로운 성장 매체로 옮깁니다.
- 절차 :
- 1. 준비 : 마이크로 매니 모니터와 함께 현미경을 사용하십시오.
- 2. 셀 선택 : 현미경에서 관심있는 단일 세포를 식별하십시오.
- 3. 격리 : 마이크로 모니터를 조심스럽게 사용하여 셀을 픽업하십시오.
- 4. 전송 : 세포를 새로운 성장 배지 (예 :작은 배양 접시 또는 마이크로 튜브)로 옮깁니다.
- 5. 인큐베이션 : 세포가 식민지로 자라도록하십시오.
3. 유세포 분석 기반 분류
- 원칙 : 유세포 분석기를 사용하여 특정 특성 (예를 들어, 크기, 형광)에 따라 세포를 분류합니다.
- 절차 :
- 1. 라벨링 : 필요한 경우 형광 마커가있는 셀을 라벨로 표시하여 다른 사람과 구별됩니다.
- 2. 분류 : 유세포 분석기를 통해 세포 서스펜션을 실행하십시오. 기기는 지정된 매개 변수에 따라 세포를 분석하고 분리합니다.
- 3. 수집 : 관심있는 세포를 새로운 성장 매체에 수집하십시오.
- 4. 인큐베이션 : 세포가 식민지로 자라도록합니다.
단일 세포 클로닝에 대한 고려 사항
* 세포 유형 : 세포 유형은 다른 성장 특성을 갖습니다. 일부는 다른 것보다 격리에 더 민감합니다.
* 성장 매체 : 배양 배지의 선택은 단일 세포 성장을 지원하는 데 중요합니다.
* 클론 순도 : 선택된 콜로니가 단일 세포에서 유래한지 확인하십시오.
* 시간 : 단일 세포가 식민지에 곱해야하므로 복제는 시간이 걸릴 수 있습니다.
* 응용 프로그램 :
- 세포주 개발 : 특정 특성으로 순수한 세포주를 만듭니다.
- 약물 스크리닝 : 개별 세포에 대한 약물 효과 테스트.
- 유전자 연구 : 단일 세포 수준에서 유전자 발현 및 돌연변이 연구.
이 방법에 대한 자세한 내용을 원하거나 특정 응용 프로그램에 대한 질문이 있으면 알려주세요!
