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실험에서 DNA와 단백질을 표지하는 데 사용됩니까?

실험에서 DNA와 단백질을 라벨링하는 데 사용되는 다양한 기술이 있으며, 각각 고유 한 장점과 응용 분야. 다음은 몇 가지 일반적인 라벨링 방법의 고장입니다.

DNA 라벨링 :

* 방사성 표지 :

* 유형 :

* Nick 번역 : DNA 폴리머 라제를 사용하여 방사성 뉴클레오티드를 DNA 단편에 포함시킨다.

* 랜덤 프라이머 라벨링 : 무작위 헥사 머 프라이머 및 DNA 폴리머 라제를 사용하여 방사성 뉴클레오티드를 포함시킨다.

* 장점 : 혼성화 분석 및 남부 블 롯팅에 널리 사용되는 매우 민감하고 널리 사용됩니다.

* 단점 : 방사성 물질 취급, 잠재적 안전 문제가 필요합니다.

* 형광 표지 :

* 유형 :

* 형광 염료 :

* 에티 디움 브로마이드 (ETBR)는 UV 광 하에서 DNA 및 형광에 결합한다.

* Sybr Green I은 ETBR보다 독성이 적은 더 민감한 염료입니다.

* 형광 표지 된 뉴클레오티드 : 이들은 PCR 또는 다른 DNA 합성 방법 동안 통합 될 수있다.

* 장점 : 높은 감도, 비 방사성, 다중 형광 염료는 멀티플렉싱을 허용합니다.

* 단점 : 방사성 표지보다 덜 민감 할 수 있으며, 염료 선택은 민감도 및 응용에 영향을 줄 수 있습니다.

* 비오틴 라벨링 :

* 유형 :

* 비 오티 닐화 뉴클레오티드 : PCR 또는 다른 DNA 합성 방법 동안 통합 될 수있다.

* 장점 : 비 방사성은 스트렙 타비 딘-접합 효소 또는 형광 프로브를 사용하여 높은 감도로 검출 할 수 있습니다.

* 단점 : 일부 형광 염료보다 덜 민감 할 수 있으며, 비오틴을 검출하기위한 추가 단계가 필요할 수 있습니다.

단백질 표지 :

* 방사성 표지 :

* 유형 :

* 대사 표지 : 세포는 방사성 아미노산을 함유 한 배지에서 성장하여 단백질이 라벨을 포함시킬 수있게한다.

* 시험 관내 표지 : 단백질은 방사성 동위 원소로 직접 표지 될 수 있습니다.

* 장점 : 단백질 발현 연구 및 결합 분석과 같은 많은 응용 분야에서 사용되는 높은 감도.

* 단점 : 방사성 물질 취급, 잠재적 안전 문제가 필요합니다.

* 형광 표지 :

* 유형 :

* 형광 염료 :

* 직접 라벨링 : 염료는 특정 아미노산 잔기 또는 태그에 직접 결합합니다.

* 간접 레이블 : 형광 염료로 표지 된 항체 또는 다른 결합 분자를 사용하여 단백질을 표적으로합니다.

* 장점 : 높은 감도, 비 방사성, 다중 형광 염료는 멀티플렉싱을 허용합니다.

* 단점 : 염료 선택은 민감도와 응용에 영향을 줄 수 있습니다.

* 비오틴 라벨링 :

* 유형 :

* 단백질의 비 오티 닐화 : 단백질은 효소 또는 화학 반응을 사용하여 직접 비 오티 닐화 될 수 있습니다.

* 장점 : 비 방사성은 스트렙 타비 딘-접합 효소 또는 형광 프로브를 사용하여 높은 감도로 검출 할 수 있습니다.

* 단점 : 일부 형광 염료보다 덜 민감 할 수 있으며, 비오틴을 검출하기위한 추가 단계가 필요할 수 있습니다.

기타 기술 :

* 친화력 표지 : 특정 리간드 또는 항체를 사용하여 단백질 또는 DNA를 표지합니다.

* 화학을 클릭하십시오 : 고유 한 기능 그룹으로 라벨링을위한 생물 형태 반응을 이용합니다.

올바른 라벨링 방법 선택 :

최상의 라벨링 방법은 특정 실험과 목표에 따라 다릅니다. 고려해야 할 요소는 다음을 포함합니다.

* 감도 : 탐지에 필요한 신호의 양.

* 응용 프로그램 : 이 기술은 의도 된 다운 스트림 애플리케이션과 호환되어야합니다.

* 비용 : 시약 및 장비 비용.

* 안전 : 방사성 표지에는 특별한 예방 조치가 필요합니다.

* 장비의 가용성 : 일부 기술에는 특수 장비가 필요합니다.

특정 라벨링 기술에 대한 자세한 정보를 원하거나 응용 프로그램에 대해 자세히 논의하려면 알려주십시오!

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