개와 고양이가 가족과 애완 동물 산업의 구성원으로 살고있는 시대에 수십억의 시장입니다.이 국내 종의 야생 선구자는 존재의 가장 어려운시기에 직면하고 있습니다. 새로 갇힌 안트로 포인이 진행됨에 따라, 세계의 생물 다양성의 많은 종으로 확장되는 또 다른 대량 멸종 사건도 있습니다.
이 경향은 보존 주의자들이 야생 종을 지원하기 위해 생식의 생명 공학을 연구하고 개발하기 시작한 1970 년대 이후 동물 생식 과학 전문가들에 의해 이미 관찰되었습니다. 기후 변화와 끊임없는 숫자의 복잡한 시나리오를 감안할 때 (오늘날, 1900 년/Living Planet Report 2014 WWF에 존재했던 호랑이의 3%가 있습니다) 무언가를해야합니다. 모든 고양이 종은 어느 정도 위험에 처해 있습니다 (IUCN Red List). 생명 공학은 세계 생물 다양성을 보호하는 엄청난 도전에 직면 한 핵심 요소가되었습니다. 21 세기의 노아의 방주는 완전한 건축 중입니다.
생식 생명 공학을 개발하기위한이 연구 노력에 대한 비전은 언젠가 이러한 기술을 통해 종의 게임 메트를 조작하고, 동결하고, 배아를 생산하며,이 배아를 수용자 여성에게 동결 시키거나 옮길 수 있다는 것입니다. 많은 일이 이미 완료되었지만 일부 기술은 여전히 개선 단계에 있습니다. 야생 고양이 남성과 관련하여 큰 발전이 이루어졌으며 오늘날 수백만의 정자를 얼리고 해동하여 수정을 위해 사용할 수 있습니다. 수십 년 전에 죽은 동물의 냉동 샘플이 여전히 많이 있습니다.
여성의 경우 상황은 완전히 다릅니다. 냉동하고 많은 수의 여성 걸레를 조작하고 사용할 수있는 원시 난소 모낭은 과학적 도전으로 남아 있습니다. 이것은 우리가 배아의 xy 측면만 가지고 있으며, 암컷의 XX 재료 인 gametes를 유지할 수 없다는 것을 의미합니다. 느린 동결 기술을 사용하여 난소 피질 조직의 동결을 위해 개발 된 프로토콜은 여전히 표현적인 결과가 없으며 비싸고 민감한 장비의 사용이 필요하며 많은 지역에서 응용을 제한합니다.
이러한 구내를 바탕으로, 우리는 브라질에는 동물 사망 후이 재료를 보존하기 위해 장비가 장착되어 있고 많은 곳에서는 연구 센터와는 거리가 멀고, 브라질에는 먼 거리, 나쁜 도로 및 동물원이 포함 된 현실 분야를 추가합니다. 동시에, 냉동 원시 난소 모낭에 필요한 품질에 따라이 물질의 운송 시간의 영향을 평가할 필요가있다. 요약하면, 브라질의 다른 지역에서 죽고 연구 센터로 안전하게 운송하는 야생 고양이 여성의 난소 수집을 허용하는 프로토콜을 개발하는 것이 필수적이었습니다. 또한이 물질에 대한 냉동 프로토콜을 개선 또는 조정하는 것이 시급했습니다.이 재료는이 재료를 준비하고 유리하고 향후 사용하기 위해 액체 N2에 저장 될 수있는 매우 기본적인 실험실에서도 가능할 수 있습니다.
.아이디어는 암컷 생식선 수송 문제와 고양이로부터 난소 피질 조직의 냉동 보존 문제를 해결하는 것이 었습니다. 이 방법론은 난소 피질을 해부하고 난소 프레랜 트랄 여포로 가득 찬 작은 조직 조각을 분리하기 전에 (5 ℃에서 최대 24 시간) 고양이 난소 수송을 시뮬레이션해야했으며, 그 일을 해동 한 후 많은 살아있는 프레랜트 어포들을 회수했습니다.
.CNPQ 장학금과 마리아 데니스 로프 (Maria Denise Lopes) 교수의지도하에 브라질의 야생 고양이 생식에 관한 연구를 통해 선구자 중 한 명인 우리는 Botucatu의 FMVZ/UNESP와 베를린 동물원 IZW Leibniz Institut 사이의 파트너십을 수립 할 수 있었으며, 우리는 Boters가없는 과학을 통해 과학을위한 다른 장학금을 승인 할 수있었습니다. 나는 2013 년 3 월 베를린으로 날아가서 고양이 재생산의 가장 저명한 과학자 중 한 명인 카타리나 유대 박사의 감독하에 연구를 개발했습니다.
우리의 서지 검토에서, 우리는 Vitoria Keros의 기사를 발견하여 여성에게 성공적으로 유리화 기술을 사용하여 난소 피질 조직을 성공적으로 보존했습니다. 이 연구는 치료 후 생식력을 보존하기 위해 종양 치료에 복종되기 전에 젊은 여성들과 함께 이루어졌습니다. 이 기사는 유리화 후 난소 샘플이 배아와 새끼를 생산했다는 사실을 밝히지 않았지만 여성의 유리체 난소 피질 조직은 느린 동결의 고전적인 기술보다 더 나은 형태 학적 결과를 얻었다는 것을 보여 주었다.
.검토 후, 우리는 일부 조종사 실험을 수행하고 고양이를위한이 등장 기술을 조정하고 목표를 달성하기 위해 실험을 작성했습니다. 1 년간의 작업에서, 우리는 우리가 고양이에 대한 난소 피질 유리화 기술을 전진시키고 검증하는 데 도움이되는 세 가지 실험을 수행했으며, 이는 난소 피질에서 24 시간 동안 운반 된 후에도 난소 피질에서 살아있는 교도전을 찾을 수있게 해주었다. 실험은 다음과 같습니다.
- 육식 동물의 사전 모낭에 대한 바이오 마커로서 중성 적색의 검증;
- 24 시간 운송 후 국내 고양이 (Felis Catus)의 난소 피질의 유리화
- 여성 사자 (Panthera Leo)의 난소 피질의 느린 동결과 유리체의 비교와 유리화 후 짧은 기간의 시험 관내 배양.
이 연구는 야생 육식 동물의 보존 전략에 긍정적 인 영향을 미치는 결과와 전략 정보를 가져 왔습니다.
실험 1에서, 중성 적색은이를 사전 육성 모낭의 바이오 마커로 사용하기 위해 검증되었다. 이 좋은 소식이 왜 있습니까? 우리가 난소 피질에 삽입 된 사전 여포의 생존력을 평가할 수있는 대부분의 기술은 분석 후에이 조직이 살아 있을지 여부를 말하기 위해 조직의 사망을 요구하기 때문이다. 형태 학적 및 분자 파라미터의 사용을 통해, 원시 여포 세포가 살아 있는지 또는 죽은 지에 대한 결론이 도출되었다. 중성 빨간색은 세포 사멸 없이이 평가를 할 수있게 해주므로 조직 샘플에 존재하는 원시 모낭 세트는 생존력을 평가 한 후 냉동 보존 또는 기타 목적으로 사용할 수 있습니다.
.이 기술의 가장 큰 장점은 타임 라인을 따라 동일한 모낭 세트의 직렬 분석을 허용한다는 것입니다. 이 기술은 원시 여포 연구와 다른 목표를 목표로하는 시험 관내 프로토콜의 시험과 관련된 실험 설계에 대한 많은 가능성을 열어줍니다. 우리가 개발 한 프로토콜은 5 개의 육식 종에 대해 검증되었습니다. 이 작품은 2015 년 칠레 산티아고에서 동물 재생에 관한 라틴 아메리카 의회에서 명예로운 언급을 받았습니다.
실험 2는 연구의 핵심이었으며 저널 cryobiology 에 발표되었습니다. 2018 년. 우리는 중성 빨간색과 결합 된 조직 학적 및 초 구조 분석을 사용하여 세포의 (사전 여포) 생존력을 측정합니다. 이 연구에서, 우리는 5 ° C에서 최대 24 시간 동안 고양이 난소를 운반하고 인간을 위해 개발 된 프로토콜을 사용하여 난소 피질 조직을 해부하고 유리질 할 수 있음을 입증 할 수있었습니다. 우리는 또한이 샘플을 해동 한 후에 수백 개의 생존 원시 모낭을 가진 조직을 얻을 수 있음을 보여 주었다. 처음으로, 현장 조건에 저렴하고 고도로 적응 기술을 사용 하여이 기술을 고양이 피질에 적용 할 수 있음이 입증되었습니다. 이 결과는 진행중인 위대한 유전자 침식을 최소화하기 위해 야생 고양이 여성을위한 유전 적 은행을 시작할 가능성을 열어주고, 미래에 사용할 야생 고양이 종의 귀중한 유전 물질을 저장합니다.
.마지막으로, 실험 3에서, 우리는 Copenhagen 동물원에서 4 명의 사자 난소에서 중성 적색 및 초 구조 분석과 인간-적응 된 유리화 프로토콜 (실험 1 및 2에서 개발)을 적용 할 수있었습니다. 우리는이 연구에 유리화와 느린 동결 프로토콜 사이의 결과 비교를 추가했습니다. 해동 후, 본 발명자들은이 샘플을 7 일의 시험 관내 인큐베이션에 적용 하였다. 일주일 후, 우리는 모든 샘플을 재평가했습니다. 결과는 인상적이었습니다. 시험 관내 7 일 후, 유리화 프로토콜로부터의 해동 샘플 만 수백 개의 살아있는 원시 모낭을 가졌고, 느린 동결 샘플은 없었다. 이런 식으로, 우리는 휴대용 및 저렴한 기술 (느린 동결과 비교하여)이 느린 동결보다 효율적임을 입증했습니다. 우리가 동물원과 보존 주의자들을위한이 프로토콜을 일반적으로 확장한다면, 그것은 멸종 위기에 처한 야생 고양이 종 에서이 귀중한 유전자 물질을 수집 하여이 유전자 은행 전략을 전 세계적으로 증폭 할 수있게 해줄 것입니다. 이 데이터는 여전히 게시되지 않았습니다.
이 모든 것이 아주 좋은 소식이지만 실제로 생명 공학은 종 생식의 자연 기술을 대체하지 않을 것입니다. 보존 전략이 아마존과 같이 생물 다양성에 전략적인 자유 생활 및 자연 지역에서 인구의 보존을 향한 것이 아니라면 생명 공학조차도 차이를 만들지 않을 것입니다. 오늘날, 이런 종류의 도구는 우리가 직면 한 경계선 상황으로 인해 대량 멸종 사건에 몰입했습니다. 보존의 진정한 초점이 될 것으로 예상되는 것은 우리가 자연과 관련된 방식의 광범위한 변화입니다.
그것을 존중하십시오. 감사하십시오. 우리는 구명 사슬의 일부 이며이 행성에서 혼자 살 수 없었습니다. 이 의식은 학교에 뿌려져서 우리의 소비 습관에 확산되어 시장과 사회를보다 연대 경제로 안내합니다-녹색과 저탄소.
이러한 결과는 연장 된 냉각 저장 후 Cat Preantral Follicle 생존이라는 제목의 기사에 설명되어 있으며,이 뒤에 vitrifization이 저널 cryobiology에 발표되었습니다. 이 작품은 Jorge Luis Araújo Martins, Maria Denise Lopes, Fabiana Ferreira de Souza 및 Unesp의 Fabio Sossai Possebon, Leibniz Institute and Wildlife Research의 Gudrun Wibbelt 및 Katarina Jewgenow가 수행했습니다.
참조 :
- Jewgenow, K.; Wiedemann, C.; Bertelsen, M.F.; Ringleb, J. 포유류 난소 및 난 모세포의 냉동 보존. 국제 동물원 연감, v.45, p.124-132, 2011.
- Keros, V.; Xella, S.; Hultenby, K.; Pettersson, K.; Sheitkhin, M.; Volpe, a.; Hreinsson, J.; Hovatta, O. 인간 난소 조직의 냉동 보존에서 유리화 대 제어율 동결. um Hum Reprod , v. 24, p.1670-83, 2009.
- Luvoni, G. C.; 테 사로, I.; Apparicio, M.; Ruggeri, E.; Luciano, A.M.; Modina, s. C. 고양이 난소 피질의 여포 및 난 모세포 품질 및 역량에 대한 유리화 효과. Reprod Domest Anim , v.47, p.385-91, 2012.
