안정적인 형질 감염은 외래 DNA를 세포에 장기적으로 도입하는 것입니다. 안정적으로 형질 감염된 세포는 자손을 통해 외래 DNA를 통과시킨다. 따라서 안정적으로 형질 감염된 세포주를 만들려면 외래 DNA가 세포주의 게놈에 통합되어야합니다. 그러나, 비 제노미 DNA에서도 안정적인 상속이 관찰 될 수있다. 성공적이고 안정적인 형질 감염은 세포주 내의 외래 DNA에 대한 선택 방법뿐만 아니라 효과적인 DNA 전달 방법을 필요로한다. 안정적으로 변환 된 세포주는 재조합 단백질의 생산, 유전자 기능 연구, 약물 발견 분석 등과 같은 광범위한 응용에 사용됩니다.
주요 영역이 적용됩니다
1. 안정적인 형질 감염된 세포주를 만드는 방법
- 안정적인 세포주 생성 프로토콜
2. 세포주에서 형질 감염된 DNA를 선택하는 방법
-안정적으로 변환 된 세포주의 선택
핵심 용어 :에피 솜 유지, 게놈, 플라스미드, 선택, 안정적으로 형질 감염된 세포주로의 통합
안정적인 형질 감염된 세포주를 만드는 방법
형질 감염은 유전자 물질이 화학적 또는 비 화학적 방법에 의해 숙주 세포에 의도적으로 도입되는 유전자 전달 방법입니다. 안정적으로 형질 감염된 세포주의 두 가지 유형이 있습니다 :
- 안정적인 세포주의 주요 유형은 형질 감염된 DNA를 숙주 유기체의 게놈으로 직접 통합하여 생성됩니다. 형질 감염된 DNA는 상 동성 재조합에 의해 게놈에 통합됩니다.
- 안정적인 세포주를 생성하는 다른 방법은 형질 감염된 DNA의 에피 솜 유지입니다. 진핵 생물 벡터는 게놈에 통합되지 않은 DNA의 형질 감염에 사용된다. 그러나, 에피 솜 DNA의 안정성은 낮다. 또한 에피 솜은 특정 유형의 종에 의해서만 유지됩니다. 안정적으로 형질 감염된 세포주는도 1에 도시되어있다 .
그림 1 :안정적으로 형질 감염된 세포주
프로세스
안정적인 세포주의 생성과 관련된 단계는 아래에 설명되어 있습니다.
- 최적의 선택 항생제 농도를 결정하는 킬 곡선 생성-세포는 일주일에 걸쳐 모든 세포를 죽이는 데 필요한 최소 항생제 농도를 결정하기 위해 항생제 농도의 양이 증가합니다. .
- 원하는 플라스미드 구조를 갖는 세포의 형질 감염-형질 감염 방법은 숙주 세포의 유형과 다릅니다. 리포좀 시약은 부착 된 세포주의 형질 감염에 사용된다. 전기 감염 또는 바이러스 방법은 현탁 세포주를 수혈하는 데 사용됩니다.
- 안정적인 폴리 클로 날 콜로니를 선택하고 확장하고 확장-48-72 시간의 형질 감염, 높은, 최적 및 낮은 농도의 선택적 항생제를 배양에 첨가하여 안정적으로 변환 된 세포주를 얻습니다. .
세포주에서 형질 감염된 DNA를 선택하는 방법
선택 마커는 성공적으로 형질 감염된 세포의 선택을 위해 형질 감염된 DNA와 공동 발현됩니다. 마커 유전자는 숙주 셀을 형질 감염 시키거나 다른 벡터 (트랜스)에 사용되는 동일한 벡터 (CIS)에있을 수있다. 네오 마이신, Zeocin, Hygromycin, Puromycin, DHFR 등과 같은 항생제에 대한 내성은 선택에 사용될 수 있습니다. 또한, 형질 감염된 유전자는 GFP로 태그 될 수있다.
결론
안정적인 세포주는 주로 형질 감염된 DNA를 게놈에 통합하여 만들 수 있습니다. 또한, 형질 감염된 DNA의 에피 솜 유지는 또한 일부 숙주 유기체에서 오랜 시간 동안 안정적인 세포주를 만드는데 사용될 수있다. 세포주에서 형질 감염된 DNA를 식별하기 위해 선택 방법이 있어야한다.
참조 :
1.“안정적인 세포주 생성의 프로토콜.” Creative Biomart , 여기에서 사용할 수 있습니다.
이미지 제공 :
1.“Kjaergaard의“Knockout Mouse Production 2” - Commons Wikimedia를 통해 자신의 작업 (CC x 3.0)
