펄스 필드 겔에서 개별 레 플리 콘을 해결하기 위해 염색체를 선형화해야합니다. 레 플리 콘은 크기에 따라 요리사가 분리합니다. 일반적으로 좋은 해결책을 얻기 위해 오랜 시간, 종종 20-30 시간 동안 운영됩니다.
Streptomyces의 선형 염색체를 접는 방법에 대한 단계는 다음과 같습니다.
1. 아가 로스 젤을 준비하십시오. 0.5x TBE 완충액에서 1% 아가 로스 겔을 만듭니다.
2. DNA 샘플을로드하십시오. DNA 샘플을 6x 로딩 완충제와 혼합하고 아가 로스 겔에로드하십시오.
3. 젤을 실행하십시오. 14 ℃에서 2V/cm에서 20-30 시간 동안 겔을 실행하십시오.
4. Visualize the DNA. 에티 디움 브로마이드로 겔을 염색하고 UV 광 하에서 DNA를 시각화합니다.
5. 염색체를 접으십시오. 스트렙토 마이 세스의 선형 염색체는 겔에서 단일 큰 밴드로 나타납니다. 염색체를 접으려면 밴드를 젤에서 잘라내어 파라 필름에 놓습니다.
6. 소형 크기로 접을 때까지 염색체 위에 파라 필름을 여러 번 접습니다.
7. 염색체를 보관하십시오. 접힌 염색체는 -20 ℃ 또는 -80 ℃에서 보관할 수있다.
참고 : 에티 디움 브로마이드로 작업 할 때는 장갑과 눈 보호를 착용하십시오. 에티 디움 브로마이드는 돌연변이겐과 발암 물질입니다.
