1. 삽입 통합 확인 :
* 제한 효소 소화 및 분석 : 유전자 변형이 특정 유전자를 삽입하는 경우, 변형 된 유기체로부터의 DNA는 삽입 된 유전자 내의 특정 부위에서 절단되는 제한 효소로 소화 될 수있다. 이어서, 결과 단편은 겔 전기 영동에 의해 분리 될 수있다. 예상 단편 크기의 존재는 유전자의 통합을 확인합니다.
* PCR 증폭 및 분석 : 특정 프라이머는 삽입 된 유전자 서열을 증폭 시키도록 설계 될 수있다. 증폭 된 생성물의 존재는 유전자의 성공적인 통합을 나타낸다.
2. 표현 검증 :
* RNA 분리 및 분석 : 변형 된 유기체로부터 추출 된 RNA는 겔 전기 영동에 의해 분석되어 삽입 된 유전자에 상응하는 mRNA의 존재를 검출 할 수있다. 이것은 유전자가 전사되고 있음을 확인합니다.
* 웨스턴 블롯 분석 : 이 기술은 삽입 된 유전자의 단백질 생성물의 존재를 감지 할 수있다.
예 :
제초제 저항성을위한 유전자를 발현하기 위해 식물을 유전자로 변형했다고 상상해보십시오.
* 1 단계 : 변형되지 않은 식물과 수정되지 않은 식물 모두에서 DNA를 분리합니다.
* 2 단계 : 제한 효소를 사용하여 DNA를 자르고, 특히 제초제 저항성 유전자가 삽입 된 영역을 표적으로합니다.
* 3 단계 : 겔 전기 영동 장치에서 소화 된 DNA를 실행합니다.
* 4 단계 : 삽입 된 유전자의 크기에 해당하는 겔에서 특정 밴드를 찾을 것입니다. 밴드가 변형 된 식물에 존재하지만 수정되지 않은 식물에 없으면 유전자의 성공적인 통합을 확인합니다.
한계 :
* 겔 전기 영동이 항상 가장 민감한 기술은 아닙니다. 유전자 발현 또는 소량의 삽입 된 DNA의 작은 변화를 감지하지 못할 수 있습니다.
* 겔 전기 영동 단독을 사용하여 다른 유형의 돌연변이 또는 유전자 삽입을 구별하기가 어려울 수 있습니다.
* 겔 전기 영동은 원하는 유전자의 존재를 확인할 수 있지만 그 기능을 확인할 수는 없습니다. 유전자가 실제로 발현되고 올바르게 작동하는지 확인하기 위해 추가 기능 연구가 필요합니다.
기타 기술 :
겔 전기 영동은 종종 유전자 변형 실험의보다 포괄적 인 평가를 제공하기 위해 시퀀싱, 남부 블 롯팅 및 QPCR과 같은 다른 기술과 함께 사용됩니다.
결론적으로, 겔 전기 영동은 DNA 및 RNA를 분석하기위한 강력한 도구이며 유전자 변형 실험의 성공을 평가하는 데 사용될 수있다. 그러나 다른 방법과 기술을 사용하여 결과를 확인하고 실험의 성공을 완전히 평가하는 것이 중요합니다.
