1. 세포 파괴 :
* 기계적 방법 :
* 균질화 : 믹서기 또는 고속 균질화 제를 사용하여 개방형 세포를 물리적으로 파괴합니다.
* 초음파 처리 : 음파를 사용하여 세포막을 방해합니다.
* 프랑스 언론 : 고압 하에서 작은 개구부를 통해 세포를 강제합니다.
* 연삭 : 물리적으로 세포를 파괴하기 위해 박격포와 유봉을 사용합니다.
* 화학적 방법 :
* 세제 : 지질을 용해시킴으로써 세포막을 방해합니다.
* 효소 : 세포벽을 분해하기 위해 리소자임과 같은 특정 효소를 사용하십시오.
* 삼투 적 충격 : 세포막을 방해하기위한 용액의 삼투압 변화.
2. 차동 원심 분리 :
* 세포 파괴 후, 세포 용 해물은 속도와 지속 시간에 증가 할 때 회전된다. 이것은 크기와 밀도에 따라 구성 요소를 분리합니다.
* 저속 원심 분리 : 핵 및 세포 잔해와 같은 더 큰 성분.
* 중간 속도 원심 분리 : 펠렛 미토콘드리아 및 리소좀.
* 고속 원심 분리 : 펠렛 마이크로 솜 및 리보솜.
* 초 원심 분리 : 단백질 및 핵산과 같은 작은 성분.
3. 밀도 구배 원심 분리 :
*이 방법은 차등 원심 분리에 의해 달성 된 분리를 추가로 개선합니다. 수 크로스 또는 다른 물질의 기울기가 튜브에 생성되고, 세포 용 해물이 상단에 겹쳐집니다. 원심 분리 동안, 성분은 자체와 동일한 밀도에 도달 할 때까지 그라디언트를 통과합니다.
* 유형 :
* 수 크로스 그라디언트 : 소기관을 분리하는 데 일반적으로 사용됩니다.
* 염화물 세스 심슘 : DNA 및 RNA 분리에 탁월합니다.
4. 친 화성 크로마토 그래피 :
*이 방법은 컬럼의 고정화 된 리간드에 표적 분자의 특이 적 결합을 이용합니다.
* 리간드 : 표적 분자에 특이 적으로 결합하는 분자.
* 열 : 고정화 된 리간드를 갖는 고체 매트릭스.
* 용리 : 결합 후, 표적 분자는 특정 용액을 사용하여 컬럼에서 용리된다.
5. 전기 영동 :
* 크기 및 전하에 기초하여 단백질을 분리하는 데 사용됩니다. 크기에 기초한 핵산.
* SDS-PAGE : 크기에 따라 단백질을 분리합니다.
* 아가 로스 겔 전기 영동 : 크기에 따라 핵산을 분리합니다.
6. 면역 침전 :
*이 방법은 항체를 사용하여 특정 단백질을 분리합니다.
* 항체 : 관심있는 특정 단백질에 결합합니다.
* 강수 : 결합 후, 단백질-항체 복합체는 용액에서 침전된다.
7. 유세포 분석 :
*이 방법은 레이저 및 형광 프로브를 사용하여 물리적 및 생물학적 특성에 따라 세포 또는 세포 성분을 분석하고 분류합니다.
예 :미토콘드리아를 분리
* 균질화 또는 프랑스 언론을 사용하여 세포가 중단됩니다.
* 세포 용 해물은 미토콘드리아 펠렛에 중간 속도로 원심 분리됩니다.
* 펠렛은 밀도 구배 원심 분리를 사용하여 재현 탁 및 추가로 정제됩니다.
방법의 선택은 특정 세포 유형, 관심있는 소기관 또는 분자 및 원하는 수준의 순도에 의존한다. 각 기술에는 강점과 약점이 있으며, 연구자들은 종종 원하는 결과를 얻기 위해 방법을 조합하여 사용합니다.
