실험
1. 재료 :
* 효소 : 작업하기 쉬운 효소가 필요합니다. 인기있는 선택은 카탈라아제 입니다 많은 생물 (감자 나 간)에서 발견됩니다. 과산화수소 (HATER)를 물과 산소로 분해합니다.
* 과산화수소 : 카탈라아제의 기질.
* 버퍼 : pH의 변화에 저항하는 솔루션. 다른 pH 수준을 생성하려면 다양한 버퍼가 필요합니다. 일반적인 선택은 다음과 같습니다.
* 인산염 완충액 : pH 범위 6-8의 경우
* 시트 레이트 완충액 : pH 범위 3-6의 경우
* 트리스 버퍼 : pH 범위 7-9의 경우
* 테스트 튜브 : 반응 혼합물을 유지하기 위해.
* 졸업 된 실린더 : 액체를 정확하게 측정합니다.
* 온도계 : 모든 반응이 동일한 온도에서 발생하도록합니다.
* 측정 장치 : 이것은 다음과 같습니다.
* 졸업 된 실린더 생산 된 산소 가스의 부피를 측정합니다.
* 분광 광도계 시간이 지남에 따라 과산화수소 농도의 감소를 측정합니다 (더 진보 된).
2. 절차 :
1. 버퍼 준비 : pH 수준이 다른 일련의 버퍼를 만듭니다 (예 :pH 4, 5, 6, 7, 8).
2. 반응 혼합물 설정 : 별도의 테스트 튜브에서 다음을 결합하십시오.
* 선택한 버퍼 솔루션의 특정 부피.
* 효소 용액 (카탈라아제)의 고정 된 부피.
* 과산화수소 용액의 고정 된 부피.
3. 통제 : 동일한 성분으로 제어 반응을 만들지 만 완충액 대신 증류수를 사용하십시오. 이것은 버퍼 자체가 반응에 영향을 미치는지 여부를 결정하는 데 도움이됩니다.
4. 인큐베이트 : 모든 테스트 튜브를 수조 또는 인큐베이터에 넣어 일정한 온도 (약 25 ° C)를 유지하십시오.
5. 관찰 : 반응 속도를 기록하십시오. 이것은 다음과 같이 할 수 있습니다.
* 생산 된 산소 가스의 양 측정 : 테스트 튜브에서 기포의 형성을 관찰하고 졸업 된 실린더를 사용하여 정해진 기간에 걸쳐 생성 된 가스의 부피를 측정하십시오.
* 과산화수소 농도의 감소 측정 : 분광 광도계를 사용하여 특정 파장에서 과산화수소의 흡광도를 측정하십시오.
6. 반복 : 동일한 효소 및 기질 농도로 실험을 반복하지만 다른 pH 완충제를 사용하여 반응 속도가 어떻게 변화하는지 확인하십시오.
3. 예상 결과 :
* 최적 pH : 효소에는 최적의 pH가 가장 잘 작동한다는 것을 알 수 있습니다. 이것은 효소의 활성 부위가 기질에 효율적으로 결합 할 수있는 올바른 모양을 갖는 pH입니다.
* 활동 감소 : 최적 이상의 pH 수준에서, 효소의 활성은 감소 할 것이다. 이는 pH가 활성 부위의 모양에 영향을 줄 수 있기 때문에 기질에 결합하는 데 덜 효과적이기 때문입니다.
주요 개념 :
* 효소는 단백질입니다 : 그들은 그들의 기능에 중요한 3 차원 모양을 가지고 있습니다.
* 활성 사이트 : 기질에 결합하는 효소의 일부.
* 최적 pH : 효소가 가장 잘 작동하는 pH.
* 변성 : 극한의 pH 수준은 효소가 모양을 잃고 비활성화 될 수 있습니다.
데이터 분석
* X 축에서 pH 값을 플로팅하고 반응 속도 (예를 들어, 생성 된 산소 가스의 부피 또는 과산화수소 농도의 부피)를 y 축에 표시합니다.
* 벨 모양의 곡선이 보이며 피크는 효소에 대한 최적의 pH를 나타냅니다.
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