트랜스 제닉 마우스 생성 :단계별 안내서
형질 전환 생쥐를 생성하는 것은 마우스 게놈에 외래 DNA를 도입하여 새로운 유전자를 발현하는 자손을 초래합니다. 다음은 일반적인 방법의 고장입니다.
1. 트랜스 진 구축 :
* 원하는 유전자를 식별하고 분리하십시오. 이것은 다른 유기체의 유전자, 마우스 유전자의 변형 된 버전 또는 완전히 합성 유전자 일 수있다.
* 트랜스 진 구조를 설계하십시오 : 여기에는 유전자 발현을 제어하기 위해 조절 요소 (프로모터 및 인핸서)를 통합하고 잠재적으로 쉽게 추적 할 수있는 리포터 유전자를 추가하는 것이 포함됩니다.
* 트랜스 진을 선형화하십시오 : 이것은 숙주 게놈으로의 통합을 위해 DNA를 준비시킨다.
2. 전달 방법 :
* 핵 주사 : 이것은 가장 일반적인 방법입니다.
* 수정란은 암컷 생쥐에서 수확됩니다.
* 트랜스 진은 수정 된 난자 (핵 퓨즈 전)의 핵에 주입된다. .
* 주사 된 알은 대리모에게 이식됩니다.
* 배아 줄기 세포 (ESC) 주사 :
* ESC는 전이 유전자를 함유하도록 배양되고 유전자 변형됩니다.
* 수정 된 ESC는 배반포 (초기 단계 배아)에 주입됩니다.
* 이 키메라 배아 (원래 및 변형 된 세포를 모두 함유 함)는 대리모에 이식됩니다.
* 생식선에 트랜스 진을 운반하는 자손이 식별됩니다.
* 바이러스 성 벡터 :
* 바이러스는 트랜스 진을 운반하고 표적 세포로 전달하도록 설계되었습니다. .
* 바이러스는 배아 또는 성인 마우스에 주사됩니다.
* 트랜스 진은 감염된 세포의 게놈에 통합됩니다.
3. 선별 및 특성화 :
* 형질 전환 동물을 식별 : PCR 및 Southern Blotting은 설립자 (트랜스 진이 게놈에 통합 된 마우스) 및 자손을 식별하는 데 사용됩니다.
* 트랜스 진 발현 평가 : RT-PCR, 웨스턴 블 롯팅 및 면역 조직 화학과 같은 기술은 상이한 조직에서 트랜스 진의 발현을 평가하는데 사용된다.
* 표현형 분석 : 동물의 생리학, 행동 및 질병 감수성에 대한 트랜스 진의 효과가 조사됩니다.
4. 트랜스 제닉 라인 번식 및 유지 :
* 트랜스 제닉 창립자들은 형질 전환 동물의 식민지를 세우기 위해 자란다.
* 정기적 인 번식은 트랜스 진의 후속 세대로 안정적인 전염을 보장합니다.
* 트랜스 제닉 라인의 유전 적 배경은 원치 않는 변화를 피하기 위해 신중하게 제어됩니다.
참고 :
* 형질 전환 생쥐는 연구를위한 강력한 도구이지만 신중한 윤리적 고려 사항과 적절한 축산이 필요합니다.
* 트랜스 제닉 마우스를 생성하는 데 사용되는 특정 방법 및 프로토콜은 원하는 결과 및 특정 관심 유전자에 따라 달라질 수 있습니다.
이것은 단순화 된 개요입니다. 트랜스 제닉 마우스를 만드는 것은 다양한 기술과 전문 지식을 포함하는 복잡한 과정입니다.
