cDNA 라이브러리 란 무엇입니까?
cDNA 라이브러리는 특정 시간에 특정 세포 또는 조직에 존재하는 mRNA 전 사체를 나타내는 클로닝 된 DNA 서열의 모음이다. 유전자 발현을 연구하고 새로운 유전자를 식별하는 강력한 도구입니다.
여기에 고장이 있습니다 :
* cDNA (보완 DNA) : 효소 역전사 효소를 사용하여 mRNA 주형으로부터 합성 된 DNA. 그것은 mRNA 서열의 "거울 이미지"입니다.
* 도서관 : 특정 유전자 또는 전 사체를 나타내는 클로닝 된 DNA 단편의 수집.
cDNA 라이브러리는 어떻게 RNA로 구성됩니까?
프로세스에는 여러 단계가 포함됩니다.
1. RNA 분리 : RNA는 관심있는 세포 또는 조직으로부터 추출된다. 이 RNA는 전형적으로 mRNA, rRNA 및 tRNA의 혼합물을 함유한다.
2. mRNA 강화 : mRNA는 mRNA 분자의 폴리 -A 꼬리에 결합하는 올리고 (DT) 크로마토 그래피와 같은 기술을 사용하여 총 RNA로부터 분리된다.
3. 역전사 : 역전사 효소 효소는 단리 된 mRNA로부터 cDNA를 합성하는데 사용된다. 이 효소는 mRNA 서열을 읽고 상보적인 DNA 가닥을 생성한다.
4. 두 번째 가닥 합성 : DNA 중합 효소를 사용하여 DNA의 제 2 가닥을 합성하여 이중 가닥 cDNA 분자를 생성한다.
5. 클로닝 : cDNA 분자는 플라스미드 또는 박테리오파지와 같은 벡터에 삽입되며, 이는 숙주 세포 내에서 독립적으로 복제 할 수있다.
6. 변형 : cDNA를 함유하는 벡터는 숙주 유기체 (예를 들어, 박테리아)에 도입되는데, 여기서 곱합니다. 각 박테리아에는 다른 cDNA 삽입물이 포함됩니다.
7. 스크리닝 : 라이브러리는 관심있는 cDNA를 포함하는 클론을 식별하기 위해 스크리닝됩니다. 이것은 특정 프로브를 사용한 혼성화와 같은 기술 또는 cDNA 인서트를 시퀀싱함으로써 수행 될 수 있습니다.
cDNA 라이브러리의 장점 :
* 은 발현 된 유전자를 나타낸다 : 적극적으로 전사되는 mRNA 분자만이 cDNA로 전환되어 주어진 시간에 발현되는 유전자에 대한 정보를 제공합니다.
* 조작하기 쉬운 : cDNA는 이중 가닥 DNA이며 표준 분자 생물학 기술을 사용하여 쉽게 조작 할 수 있습니다.
* 다양한 응용 분야에 사용 : cDNA 라이브러리는 유전자 발현 연구, 유전자 발견, 기능 유전체학 및 유전자 요법에 사용됩니다.
cDNA 라이브러리의 한계 :
* 발현 유전자로 제한 : 전체 게놈에 대한 정보가 포함되어 있지 않으며 전사되는 유전자 만 포함합니다.
* 는 특정 세포 또는 조직을 나타냅니다. cDNA 라이브러리는 RNA의 공급원에 특이 적이다.
* 은 완전히 대표되지 않을 수 있습니다 : 모든 mRNA 분자가 cDNA 라이브러리에서 동일하게 표현되는 것은 아니며, 이는 유전자 발현 연구의 정확도에 영향을 줄 수 있습니다.
요약하면, cDNA 라이브러리는 특정 시간에 특정 세포 또는 조직에서 활성 유전자의 스냅 샷을 제공합니다. 유전자 발현을 이해하기위한 강력한 도구이며 생물학적 연구에 다양한 응용이 있습니다.
