자외선 (UV)의 흡광도를 측정하여 RNA 샘플을 정량화하십시오. 나노 드롭 분광 광도계는 샘플의 1 ~ 2 마이크로 리터 만 사용하여 복구 할 수 있습니다. 다른 분광 광도계에는 훨씬 더 큰 샘플이 필요합니다. 1cm 광 경로에서 260nm의 UV 파장에서 뉴클레오티드에 대한 멸종 계수는 20이다.이 멸종 계수에 기초하여, 동일한 조건 하에서 40µg/mL RNA의 흡광도는 하나이다. 이 정보를 사용하면 RNA 샘플의 농도를 계산할 수 있습니다.
- 분광 광도계
- 계산기
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분광 광도계를 보정하는 것을 잊지 마십시오. 빠른 전기 영동 젤을 실행하면 사양 결과가 확인됩니다.
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샘플이 순수하다고 가정하지 마십시오. OD260/OD280 비율에 대한 시간을 보내면 시간과 돈이 도로로 절약됩니다.
필요한 경우 샘플을 희석하십시오. 마이크로 커벳의 표준 희석은 1:40입니다. 78μl 멸균 수에 2μL RNA 샘플을 첨가 하여이 희석을하십시오.
.특정 분광 광도계의 프로토콜을 따라 블랭크를 사용하여 기계를 보정 한 다음 260nm의 UV 파장에서 샘플의 광학 밀도를 결정하십시오.
.샘플의 흡광도에 희석 계수에 40μg RNA/ml를 곱하십시오. 방정식은 다음과 같습니다.“RNA 농도 (µg/ml) =(OD260) x (희석 계수) x (40 µg RNA/ml)/(1 OD260 단위)””(HOFSTRA.EDU) 예를 들어 :샘플을 1:40으로 희석 한 경우 0.08 x 40 x 40 =128 μg =0.13이면 흡수 판독 값을 0.08 x 40 =0.08 x 40 =µg/μl
280nm UV 파장에서 다른 흡광도 판독 값을 가져 와서 샘플의 순도를 파악하십시오. OD 260/ OD 280의 비율은 샘플이 단백질 또는 페놀으로 오염되는지 여부를 나타냅니다. 1.8 ~ 2.0의 결과는 품질 RNA를 나타냅니다.
