주요 차이 역상과 소수성 상호 작용 크로마토 그래피 사이에서 역상 크로마토 그래피 (RPC)는 더 많은 소수성 매체를 사용하는데, 이는 더 강한 상호 작용을 초래하는 반면, 소수성 상호 작용 크로마토 그래피 (HIC)는 역상 크로마토 그래피 의 배지와 비교할 때 덜 소수성 매체를 사용한다는 것입니다. .
역상 크로마토 그래피 및 소수성 상호 작용 크로마토 그래피는 크로마토 그래피 배지의 소수성 표면과 생체 분자 표면의 소수성 패치 사이의 상호 작용에 의존하는 두 가지 크로마토 그래피 기술입니다.
주요 영역을 다루었습니다
1. 역상 크로마토 그래피
- 정의, 단계, 응용 프로그램
2. 소수성 상호 작용 크로마토 그래피
- 정의, 단계, 응용 프로그램
3. 역상 크로마토 그래피와 소수성 상호 작용 크로마토 그래피 사이의 유사점은 무엇입니까
- 일반적인 기능의 개요
4. 역상 크로마토 그래피와 소수성 상호 작용 크로마토 그래피의 차이점
- 주요 차이점 비교
주요 용어
소수성 상호 작용 크로마토 그래피, HIC, 미디어, 역상 크로마토 그래피, RPC
역상 크로마토 그래피
역상 크로마토 그래피 (RPC)는 단백질, 펩티드 및 올리고 뉴클레오티드와 같은 생체 분자의 정제 및 분석에 사용되는 크로마토 그래피 기술입니다. 고해상도 분리를 제공하며 펩티드 매핑 및 순도 점검에 이상적입니다. RPC는 펩티드와 올리고 뉴클레오티드의 최종 연마에 더 자주 사용됩니다.
두 가지 주요 유형의 소수성 매체는 정지상으로 사용될 수 있습니다 :탄소 사슬로 덮인 실리카 비드 또는 알몸 소수성 중합체. 컬럼에는 샘플이 적용되는 포장 베드 형태의 소수성 매체가 포장됩니다. 트리 플루오로 아세트산 (TFA)과 같은 이온-페어링 제를 이동상에 첨가하여 소수성 상호 작용의 형성을 향상시킬 수있다. 5 % 아세토 니트릴과 같은 유기 개질제는 처음에 사용되며 아세토 니트릴의 %를 증가시켜 용리를 시작할 수 있습니다.
그림 1 :역상 크로마토 그래피 이론
덜 소수성/더 극성 인 생체 분자는 먼저 용리 될 것이며, 더 많은 소수성 분자는 나중에 용리됩니다. RPC는 해상도가 가장 높은 크로마토 그래피 기술입니다.
소수성 상호 작용 크로마토 그래피
소수성 상호 작용 크로마토 그래피 (HIC)는 중간 정도의 조건 하에서 소수성에 기초한 생체 분자 분리에 사용되는 다른 기술이다. 초기 샘플 농도 및 정화에서 샘플을 암모늄 황산염 침전에 적용해야 할 때 단백질의 정제에 이상적인 기술이다. 황산 암모늄 강수량 동안의 상승 된 소금 수준은 소수성 성분 간의 상호 작용을 증가시킨다.
그림 2 :소수성 상호 작용에 대한 높은 염 농도의 영향
HIC의 소수성 매체는 알킬 또는 아릴기를 함유하는 리간드로 코팅 된 구형 입자의 불활성 매트릭스로 구성됩니다. 소수성 상호 작용은 적당히 높은 염 농도 (일반적으로 1-2m 황산 암모늄 또는 3m NaCl)에서 발생합니다. START 완충액은 불순물을 씻어 내면서 매체에 관심있는 단백질의 결합을 보장합니다. 용리 완충액은 단백질과 고정상 사이의 상호 작용을 약화시키고, 소금 농도가 낮다.
역상 크로마토 그래피와 소수성 상호 작용 크로마토 그래피 사이의 유사성
- 역상 및 소수성 상호 작용 크로마토 그래피는 소수성에 기초한 생체 분자 분리에 사용되는 두 가지 기술입니다.
- 두 기술의 이동 단계는 물 또는 유기 용매입니다.
- 그들은 포장 된 침대 기둥을 사용합니다.
- 시작 버퍼는 원하는 분자의 컬럼에 결합을 보장합니다.
- 소수성이 가장 낮은 분자는 먼저 용리 될 수 있지만 더 많은 소수성 분자는 나중에 용리 될 수 있습니다. .
- 최종 세척 단계는 가장 끈적 끈적한 결합 분자를 속박합니다.
- 두 기술의 해상도는 선택성 (피크 사이의 분리 정도), 효율 (샘플의 질량 및 보유 시간의 효율성 (좁은 대칭 피크 생성 능력)의 조합입니다.
역상 크로마토 그래피와 소수성 상호 작용 크로마토 그래피의 차이
정의
리버스 상 크로마토 그래피 (RPC)는 혼합물에서 분자의 소수성에 기초한 가장 높은 해상도 분리 기술을 지칭하는 반면, 소수성 상호 작용 크로마토 그래피 (HIC)는 소수성에 기초한 유형의 분리 기술을 지적하지만, 비교적 MOMD 조건에 따라 작동한다.
.소수성
rpc는 더 많은 소수성 조건에서 작동하는 동안 HIC는 비교적 온화한 소수성 조건에서 작동합니다.
상호 작용
역상 크로마토 그래피는 분자와 유기 개질제에 의해 용출 중에 반전되는 고정기 사이의 더 강한 상호 작용으로 이어지고 HIC는 정지상과 분자 사이의 중간 정도 높은 상호 작용으로 이어집니다.
.소수성 매체
rpc는 탄소 사슬로 덮인 실리카 비드를 사용하거나 알몸 소수성 폴리머를 사용하는 반면 HIC는 알킬 또는 아릴 그룹을 함유하는 리간드로 코팅 된 구형 입자의 불활성 매트릭스를 사용합니다.
.시작 버퍼 시작
RPC의 시작 버퍼는 trifluoroacetic acid (TFA)를 사용하는 반면 HIC의 시작 버퍼는 적당히 높은 소금 농도를 사용합니다.
용리
아세토 니트릴의 증가 된 비율은 RPC에서 용리를 시작하는 반면, 소금 농도가 감소하는 것은 HIC의 용리를 시작합니다.
해상도
역상 크로마토 그래피는 가장 높은 해상도의 크로마토 그래피 기술이며 RPC와 비교할 때 HIC의 해상도는 낮습니다.
응용
rpc는 단백질, 펩티드 및 올리고 뉴클레오티드의 분리에 사용되는 반면, HIC는 주로 단백질의 정제에 사용됩니다.
결론
역상 크로마토 그래피는 고도로 소수성 조건에서 작동하는 가장 높은 해상도의 크로마토 그래피 기술입니다. 그러나 HIC는 중간 소수성 조건 하에서 작동합니다. RPC와 HIC는 소수성에 기초한 두 가지 유형의 분리 기술입니다. RPC와 HIC의 주요 차이점은 각 기술에 사용되는 소수성 정도입니다.
참조 :
1. 소수성 상호 작용 및 역전 상 크로마토 그래피 :원리 및 방법 . GE Healthcare, 2006. 여기에서 구할 수 있습니다
이미지 제공 :
1. Nategmon의“역상 구배 용리 회로도”-Commons Wikimedia
2를 통한 자체 작업 (CC By-SA 4.0). English Wikibooks의 Daliak의“Hicsalt” - En.wikibooks에서 Commons로 옮겨졌습니다. (공개 도메인) Commons Wikimedia를 통해
