1. 세포 용해 :
- 세포 (식물 또는 동물 조직), 소금, 액체 식기 세척 비누 및 DNA 추출 완충액 (TE 완충액 또는 트리스 -EDTA 완충액)이 포함 된 재료를 수집하십시오.
- 작은 조직 샘플을 박격포와 유봉에 넣거나 뚜껑이 달린 작은 용기에 넣습니다.
- 샘플에 소량의 소금을 첨가하십시오 (1 그램의 조직 당 약 1/4 티스푼).
- 혼합물에 액체 식기 세척 비누를 몇 방울 첨가하고 조직을 분쇄하거나 철저히 으깨십시오.
-이 단계는 세포막을 열어 DNA를 방출합니다.
2. 단백질 침전 :
- 용 해물 (깨진 세포의 혼합물)을 원심 분리 튜브로 옮깁니다.
- 용 해물 부피와 동일한 냉간 DNA 추출 완충액의 부피를 추가하십시오. 철저히 섞으십시오.
-DNA 추출 완충액은 세포막 및 단백질을 용해시키는 데 도움이되는 세제뿐만 아니라 용액에서 단백질 (DNA와 관련된 히스톤 포함)을 침전시키는 데 도움이되는 염 용액을 포함합니다.
- 단백질은 덩어리를 형성하고 DNA와 분리되어 있습니다.
3. DNA 침전 :
- 고속에서 몇 분 동안 혼합물을 원심 분리하십시오 (약 12,000 ~ 15,000 rpm).
- 이로 인해 침전 된 단백질과 세포 파편이 튜브 바닥에 펠렛을 형성하여 DNA를 상청액 (펠렛 위의 액체)에 남겨 둡니다.
4. DNA 수집 :
- DNA를 포함하는 상청액을 새로운 튜브로 조심스럽게 제거하십시오.
- 대부분 단백질과 세포 잔해물이 포함되어 있으므로 펠릿이 전달되는 것을 피하십시오.
-DNA는 이제 대부분의 세포 성분 및 단백질이없는 비교적 순수한 형태입니다.
에탄올 추출 :
1. DNA 강수량 :
- 소금 비누 추출로부터 DNA 용액을 함유하는 튜브에 동일한 부피의 감기 95% -100% 에탄올을 첨가하십시오.
- 튜브를 여러 번 뒤집어 부드럽게 섞습니다. 이것은 DNA를 전단시킬 수 있으므로 와류가 아닙니다.
- DNA는 용액에서 흰색, 끈적 끈적한 질량으로 침전되기 시작합니다.
2. DNA 세척 :
- 고속에서 몇 분 동안 혼합물을 원심 분리하십시오 (약 12,000 ~ 15,000 rpm).
- DNA는 튜브 바닥에 펠렛을 형성합니다. 펠렛을 방해하지 않고 상청액 (에탄올 용액)을 조심스럽게 제거하십시오.
3. DNA 건조 :
- 잔류 염을 제거하기 위해 차가운 70% 에탄올로 DNA 펠렛을 부드럽게 헹구십시오.
- 튜브 바닥에서 DNA를 수집하기 위해 간단히 원심 분리합니다.
- 펠렛을 방해하지 않고 에탄올을 조심스럽게 제거하십시오.
- DNA 펠릿이 몇 분 동안 공기 건조하도록하십시오.
4. DNA Resspension :
-DNA 펠렛을 함유 한 튜브에 소량의 DNA 추출 완충액 (TE 완충액 또는 트리스 -EDTA 완충액)을 추가하십시오.
- 마이크로 피펫을 사용하여 DNA가 완전히 용해 될 때까지 위아래로 피펫 팅하여 부드럽게 재현 탁하십시오.
-DNA는 이제 PCR, 겔 전기 영동 또는 기타 분자 생물학 기술과 같은 추가 분석을 준비했습니다.
두 방법 모두 세포막을 방해하고, DNA를 방출 한 다음, 침전 및 원심 분리를 통해 다른 세포 성분으로부터 DNA를 분리하는 것을 목표로한다. 그들은 기본 실험과 교육 목적으로 DNA를 추출하는 간단하고 비용 효율적인 방법을 제공합니다.
