1. Nick Translation :
* 반응 : 이 방법은 효소 DNA 폴리머 라제 I 를 사용한다 DNA 가닥의 뉴클레오티드를 표지 된 뉴클레오티드로 대체합니다. dnase I 를 사용하여 DNA에 단일 가닥 브레이크 (Nicks)를 도입하여 작동합니다. . 중합 효소는 Nick을 프라이머로 사용하고 갭에 표지 된 뉴클레오티드를 포함시킨다.
* 동위 원소 : 일반적으로 사용되는 동위 원소는 ³²p-dctp 입니다 또는 ³²p-datp .
* 장점 : 높은 특이 적 활성 (라벨 밀도)을 생성하고 단일 가닥 및 이중 가닥 DNA 모두에 적합합니다.
* 단점 : 특정 효소가 필요하며 완충 조건에 민감 할 수 있습니다.
2. 랜덤 프라이머 라벨링 :
* 반응 : 이 방법은 짧은 무작위 올리고 뉴클레오티드 프라이머와 DNA 폴리머 라제 I 를 사용합니다. (Klenow Fragment) 템플릿 가닥에 상보적인 새로운 DNA 가닥을 합성합니다. 중합 효소는 합성 동안 표지 된 뉴클레오티드를 포함한다.
* 동위 원소 : 일반적으로 사용되는 동위 원소는 ³²p-dctp 입니다 또는 ³²p-datp .
* 장점 : 효율적이며 단일 가닥 및 이중 가닥 DNA를 모두 표시하는 데 사용될 수 있습니다.
* 단점 : 랜덤 프라이머 결합으로 인해 배경 표지를 도입 할 수 있습니다.
3. 키나제로 끝 라벨링 :
* 반응 : 이 방법은 폴리 뉴클레오티드 키나제 를 사용합니다 DNA 단편의 5 '말단에 인산염 그룹을 추가합니다. 포스페이트 그룹에는 방사성 동위 원소가 표시되어 있습니다.
* 동위 원소 : 일반적으로 ³²p-atp 또는 ³³p-atp 사용됩니다.
* 장점 : 간단하고 간단하며 특히 짧은 DNA 단편을 표시하는 데 유용합니다.
* 단점 : DNA의 5 '끝에만 레이블을 지정합니다.
4. PCR 라벨링 :
* 반응 : 이 방법은 방사성 DNTP 를 사용하는 것입니다 (예 : ³²p-dctp ) PCR 반응 동안. 이것은 레이블을 새로 합성 된 DNA 가닥에 통합합니다.
* 동위 원소 : 일반적으로 사용되는 동위 원소는 ³²p-dctp 입니다 또는 ³²p-datp .
* 장점 : 효율적이며 특정 DNA 서열을 라벨링하는 데 사용될 수 있습니다.
* 단점 : 다른 방법보다 덜 효율적일 수 있으며 높은 특이 적 활동을 얻기가 어려울 수 있습니다.
5. 시험 관내 전사 :
* 반응 : RNA 폴리머 라제 를 사용합니다 DNA 주형을 RNA로 전사합니다. RNA는 합성 동안 방사성 뉴클레오티드로 표지된다.
* 동위 원소 : 일반적으로 ³²p-utp 또는 ³ s-utp .
* 장점 : 혼성화 연구를 위해 고도로 라벨이 붙은 RNA 프로브를 생성 할 수 있습니다.
* 단점 : 시험 관내 전사를위한 특수한 시약 및 조건이 필요합니다.
라벨링 방법의 선택은 표지 된 DNA의 특정 적용 및 원하는 특성에 의존합니다.
참고 : 안전 문제와 비 방사성 표지 방법의 이용 가능성으로 인해 최근 몇 년 동안 방사성 동위 원소의 사용이 감소하고 있습니다. 그러나, 방사성 표지는 여전히 특정 응용 분야에서, 특히 민감성 및 낮은 풍부 목표를 감지하는 능력에 대한 몇 가지 장점이있다.
