주요 차이 - PCR 대 QPCR
PCR (중합 효소 연쇄 반응)과 QPCR (정량 PCR)은 다양한 목적으로 DNA를 증폭시키기 위해 생명 공학에서 사용되는 두 가지 기술입니다. PCR은 비교적 간단한 기술입니다. QPCR은 실시간 PCR 라고도합니다 또는 디지털 PCR . 주요 차이 PCR과 QPCR 사이에는 PCR이 정 성적 기술이고 QPCR은 정량적 기술이라는 점입니다. . PCR은 결과를 "유무 부재"로 읽을 수 있습니다. 그러나 qPCR에서, 각주기에서 증폭 된 DNA의 양은 정량화된다. RNA가 PCR에 사용되는 경우,이 기술은 RT-PCR (역전사 PCR)으로 알려져 있고 RNA가 QPCR에 사용되는 경우이 기술을 QRT-PC로 알려져 있습니다.
주요 영역을 다루었습니다
1. pcr
- 정의, 프로세스, 사용
2. qpcr
- 정의, 프로세스, 사용
3. PCR과 QPCR의 유사점은 무엇입니까
- 일반적인 기능의 개요
4. PCR과 QPCR의 차이점은 무엇입니까
- 주요 차이점 비교
주요 용어 :아가 로스 겔 전기 영동, 앰플 리콘, DNA 폴리머 라제, 형광 염료, PCR, 프로브, QPCR, RT-QPCR
pcr
pcr은 선택된 DNA 세그먼트를 증폭시킴으로써 짧은 서열의 DNA를 분석 할 수있는 생명 공학 기술을 나타냅니다. 단일 반응에 의해 매우 작은 부피가 필요하기 때문에 비교적 민감한 방법입니다. 이 기술은 DNA 폴리머 라제의 새로운 가닥을 보완적인 방식으로 제공된 템플릿 가닥에 합성하는 능력에 기초한다. PCR의 반응 혼합물은 DNA 폴리머 라제, DNA 뉴클레오티드, 프라이머, 증폭 될 DNA 주형 및 마그네슘으로 구성된다. 증폭은 열구 사이클러 내부에서 수행된다. 이 반응에 고온이 사용되므로 DNA 폴리머 라제는 내열성이 있어야합니다. PCR에 사용 된 두 가지 유형의 DNA 폴리머 라제는 TAQ 입니다. DNA 폴리머 라제 및 pfu DNA 폴리머 라제. taq DNA 폴리머 라제는 PCR에 널리 사용됩니다.
DNA 폴리머 라제는 새로운 가닥을 합성하기 위해 3 '말단에 기존 DNA 가닥이 필요합니다. 따라서, 올리고 뉴클레오티드 프라이머는 DNA 합성의 개시를 위해 반응 혼합물에 첨가된다. PCR에서 프라이머의 요구 사항은 템플릿에서 특정 영역 만 증폭 할 수있게한다. 표적 시퀀스는 전방 및 리버스 프라이머에 의해 측면에있다. PCR이 끝나면 amplicons 라고하는 특정 DNA 서열의 새로운 사본 , 수십억에 축적됩니다. PCR의 구성 요소는 PCR 성능을 향상시키면서 실패를 최소화하는 방식으로 최적화되어야합니다. 표준 PCR 반응은도 1에 도시되어있다
그림 1 :PCR
PCR의 단계
PCR의 세 단계는 아래에 설명되어 있습니다.
- denaturation -이중 가닥 DNA 템플릿은 94-95 ° C로 가열하여 2 개의 단일 가닥으로 분리됩니다.
- 어닐링 - 전방 및 역방향 프라이머는 템플릿의 보완 서열에 결합합니다. 온도는 프라이머 조합의 용융 온도에 따라 다릅니다.
- 프라이머 확장 - DNA 폴리머 라제 효소는 성장하는 가닥에 상보한 염기를 추가하여 각 프라이머를 3'end로 확장합니다. taq의 최적 온도 중합 효소, 즉 72 ° C는 연장 단계에서 온도로 사용됩니다. 연장 시간은 템플릿 가닥의 기본 쌍 수에 따라 다릅니다.
세 단계는 28-35 번 반복됩니다. 아가 로스 겔 전기 영동은 PCR 생성물의 크기 분별에 사용된다. 생성물은 에티 디움 브로마이드에 의해 염색되고 UV에서 관찰된다. PCR 생성물 또는 증폭 된 DNA는 복제, 시퀀싱 또는 유전자형 분석에 사용될 수 있습니다.
qpcr
qpcr은 생명 공학의 기술을 말합니다. 따라서, 그것은 정량적 PCR의 유형이다. DNA와 RNA는 모두 QPCR로 사용될 수 있습니다. RNA가 템플릿으로 사용되면 먼저 cDNA로 역전되어야합니다. 따라서 이러한 유형의 QPCR은 rt-qpcr 로 알려져 있습니다 . 전통적인 PCR은 cDNA 또는 일반적인 DNA 샘플에 대해 수행됩니다. 그러나, QPCR에서, 형광 염료는 PCR 사이클의 각 단계에서 PCR 생성물을 라벨링하는데 사용된다. 이를 통해 PCR이 진행됨에 따라 데이터 수집이 가능하여 PCR의 지수 단계 동안 앰플 리콘의 정량화가 가능합니다. QPCR에 사용되는 주요 염료 유형은 Sybr Green입니다. 염료는 이중 가닥 DNA에 결합합니다. 형광이 증폭 된 DNA의 양과 비례하여 증가함에 따라, 정량화는 "실시간"으로 수행 될 수있다. 염료 사용의 주요 단점은 샘플에서 하나의 특정 생성물의 정량화를 허용한다는 것입니다. 염료 외에도 프로브를 정량화 과정에서도 사용할 수 있습니다. Taqman 프로브는 QPCR에 사용되는 주요 올리고 뉴클레오티드 프로브의 주요 유형 중 하나이며 형광 방출 과정은 그림 2 에 나와 있습니다. .
그림 2 :Taqman Probe
프로브는 동일한 샘플 내에서 여러 PCR 제품을 감지하는 방식으로 설계 될 수 있습니다. Taqman 프로브는 가수 분해 프로브의 주요 유형 중 하나입니다. 이 프로브를 PCR 생성물에 혼입하면 형광 단이 노출되어 형광이 방출됩니다. 형광 염료는 PCR 생성물에 더 구체적입니다. 따라서, 이들은 대부분의 진단 분석에 사용되어 PCR 생성물을 감지합니다.
PCR과 QPCR의 유사성
- PCR과 QPCR
- 전통적인 폴리머 라제 연쇄 반응은 PCR 및 QPCR 모두에서 핵심 기술로 수행됩니다.
- RNA는 리버스 전사를 첫 번째 반응으로 사용하여 PCR 및 QPCR에 사용될 수 있습니다.
PCR과 QPCR의 차이
정의
PCR : PCR은 선택된 DNA 세그먼트를 증폭시킴으로써 짧은 서열의 DNA를 분석 할 수있는 생명 공학 기술이다.
qpcr : QPCR
정량적/질적
PCR : PCR은 질적 기술입니다.
qpcr : QPCR은 정량적 기술입니다.
제품의 탐지
PCR : 이 제품은 PCR의 아가 로스 겔 전기 영동에 의해 감지됩니다.
qpcr : 제품은 qpcr의 각 증폭주기에서 감지 될 수 있습니다.
데이터 수집
PCR : 데이터는 PCR에서 반응이 끝날 때 수집됩니다.
qpcr : 데이터는 QPCR에서 반응의 지수 단계에서 수집됩니다.
해상도
PCR : PCR은 해상도가 매우 열악합니다.
qpcr : QPCR은 해상도가 매우 높습니다.
염료
PCR : PCR은 에티 디움 브로마이드를 사용하여 PCR 동안 생성물을 염색합니다.
qpcr : QPCR은 형광 염료를 사용하여 제품을 감지합니다.
시간
PCR : PCR은 시간이 더 소요되는 방법입니다.
qpcr : QPCR은 시간이 덜 소요됩니다.
RNA
PCR : RT-PCR은 RNA를 주형으로 사용하는 PCR의 유형입니다.
qpcr : RT-QPCR은 RNA를 템플릿으로 사용하는 QPCR의 유형입니다.
역할
PCR : PCR은 특정 게놈 조각의 존재 또는 부재를 감지하는 데 사용됩니다.
qpcr : QPCR은 샘플에서 특정 조각을 정량화하는 데 사용됩니다.
결론
pcr과 qpcr은 생명 공학에서 다양한 목적을 위해 DNA를 증폭시키기 위해 사용되는 두 가지 유형의 기술입니다. PCR은 DNA 단편의 존재 또는 부재를 식별하는 데 사용되는 전통적인 증폭 방법이다. QPCR은 샘플에서 특정 조각을 정량화하는 데 사용됩니다. 따라서, PCR은 질적 기술이고 qPCR은 정량적 기술이다. 이것은 PCR과 QPCR의 주요 차이점입니다.
참조 :
1.“QPCR 대 디지털 PCR 대 전통적인 PCR.” Thermo Fisher Scientific , 여기에서 사용할 수 있습니다.
이미지 제공 :
1. MadPrime의“PCR”-Commons Wikimedia
2를 통한 자신의 작업 (CC By-SA 3.0). 사용자의 "Taqman":BrainDamaged - Commons Wikimedia를 통해 원래 업로더 (Public Domain)의 자신의 작업
