1. 세포에서 DNA를 추출하십시오 :
- 세포 용해 완충액 또는 DNA 추출 키트를 사용하여 세포막을 열고 내용물을 방출하십시오.
- 원심 분리 또는 강수량과 같은 방법을 통해 DNA를 다른 세포 성분과 분리하십시오.
2. DNA를 정화하십시오 :
- 효소 처리 (예를 들어, Proteinase K, RNase A) 또는 정제 기술 (예를 들어, 페놀 클로로포름 추출, 컬럼 크로마토 그래피)을 사용하여 단백질 및 RNA와 같은 불순물을 제거합니다.
3. DNA를 단편으로 소화 :
- DNA를 제한 효소로 처리하여 더 작은 정의 조각으로 자릅니다.
- 특정 DNA 서열을 인식하고 절단하는 제한 효소를 선택하십시오.
4. DNA 단편의 크기 분별 :
- 겔 전기 영동 또는 크기 배제 크로마토 그래피와 같은 기술을 사용하여 크기에 따라 DNA 단편을 분리하십시오.
5. 벡터에 대한 DNA 단편 :
- DNA 조각을 복제 또는 발현 벡터와 결합하여 DNA 복제를위한 필수 서열 및 숙주 유기체에서의 발현을 포함한다.
-DNA 리가 제를 사용하여 DNA 단편을 벡터로 묶으십시오.
6. 재조합 벡터를 변환하거나 형질 감염시킵니다 :
- 형질 전환 (박테리아), 형질 감염 (진핵 세포) 또는 전기 천공과 같은 기술을 통해 재조합 벡터를 숙주 세포 (박테리아, 효모, 동물 세포)에 소개합니다.
7. 원하는 DNA 단편으로 세포를 선택하고 복제합니다.
- 형질 전환 또는 형질 감염된 세포를 배양하고 관심있는 DNA 단편을 포함하는 재조합 벡터를 성공적으로 통합 한 세포를 선택하십시오.
- 이들 세포를 복제하여 원하는 DNA 삽입물을 운반하는 클론 집단을 얻습니다.
8. 클론 개체군 확장 및 분리 :
- 클론 집단을 성장시켜 DNA 단편을 함유하는 세포의 수를 확장하십시오.
-이 클론 집단으로부터 DNA를 분리하십시오.
9. DNA 단편의 존재와 완전성을 확인하십시오 :
- 제한 효소 소화, 겔 전기 영동 또는 시퀀싱을 사용하여 분리 된 DNA를 분석하여 DNA 단편의 존재 및 구조적 무결성을 확인하십시오.
10. 원하는 DNA 작 제물을 전파하고 유지합니다 :
- 추가 분석, 연구 또는 생명 공학적 응용을 위해 원하는 DNA 단편을 함유하는 클론 집단 또는 DNA 구조물을 전파하고 유지한다.
이러한 단계를 수행함으로써 DNA 단편에서 염색체를 성공적으로 생성하여 관심있는 특정 DNA 서열을 연구, 조작 또는 활용할 수 있습니다.
