Ninhydrin (포뮬러 C9H6O4 및 IUPAC 이름 2,2- 디 하이드 록시 벤젠 -1,3- 디온을 갖는 화학 분자)이 분석 물의 시험 용액에 첨가 될 때, 결과는 Ninhydrin 농도로 알려져있다. 분석 물에서 깊은 푸른 색의 발달은 암모니아, 1 차 또는 2 차 아민 또는 아미노산의 존재 때문이라고 생각됩니다.
Ninhydrin 에 대한 테스트
분석 물의 아미노기는 Diketohydrin과 비교할 수있는 분자의 형성을 초래한다. 이 조합의 색상은 때때로 Ruhemann 's Purple이라고도하는 진한 파란색입니다.
유리 아미노산의 아미노기는 산화제로서 작용하는 특성을 갖는 ninhydrin과의 화학 반응에 적용된다. 아미노산은 니 하이드린에 노출 될 때 산화제 탈 아미네이션을 겪고, CO2, NH3 및 알데히드의 방출뿐만 아니라, 히드 린다 틴의 형성 및 반응의 다른 부산물 (니 하이드 린의 감소 된 형태).
이 반응의 결과로, 암모니아는 또 다른 닌히 드린 분자와 반응하여 Diketohydrin (Ruhemann 's Complex라고도 함)의 형성을 초래합니다. 생생한 청색은이 화합물의 존재에 기인합니다. 프롤린은 아미노산이기 때문에 분석 물에 프롤린과 같은 아미노산을 함유 할 때 황색 화합물이 생성됩니다. 아스파라긴이 사용될 때, 결과 단지는 그것에 갈색이 있습니다.
Ninhydrin 테스트는 다음과 같은 원칙을 기반으로합니다.
- Ruhemann 's Purple으로 알려진 깊은 자주색 또는 푸른 색은 화합물 Ninhydrin (2,2- Dihydroxyindane-1,3-dione)의 두 분자가 유리 알파-아미노산과 반응 할 때 생성됩니다. 이 반응의 이유는 알려져 있지 않습니다.
- 이 반응에 사용될 때, 산화제 니 하이드린은 아미노산의 탈 아미네이션 및 데카르 복실화가 고온에서 발생하여 공정이 진행되게한다. .
- 이 반응에 이어 감소 된 닌히 드린 분자, 방출 된 암모니아 및 제 2 반응의 생성물 인 닌히 드린의 제 2 분자 사이의 축합이 뒤 따른다. .
- Diketohydrin의 복합체를 구축하는 데 전체 반응 시간이 걸립니다.
- 이 테스트는 프롤린 및 하이드 록시 프롤린과 같은 아미노산이 테스트 될 때 색상의 황색 오렌지 인 이미늄 염을 생성합니다.
- 아미노산 아스파라긴과 같은 유리 아인드 그룹을 포함하는 단백질에 대해서도 마찬가지입니다.
- 형성된 복합체의 강도는 형성 용액에서 아미노산의 농도와 관련이있다.
- 또한, 존재하는 아미노산의 유형은 색상이 어떻게 나타나는지에 영향을 미칩니다.
절차
- 니 하이드린의 2 % 용액은 먼저 10ml의 에탄올 또는 아세톤에 0.2 그램의 약물을 용해 시켜서 만들어야한다. 그 후 솔루션을 사용할 수 있습니다.
- 이 시점에서 증류수에서 아미노산 (분석 물)의 1 % 용액을 만들어야합니다. 이 용액에 2 % 닌히 드린 솔루션을 몇 방울 첨가하여 작동하기 위해이 용액에 추가해야합니다.
- 테스트 튜브를 약 5 분 동안 따뜻한 수조에 넣어야합니다.
결론
따라서 아미노산의 존재, 짙은 파란색/바이올렛 색상의 발달은 그들의 존재를 보여줍니다.
Ninhydrin 검사 결과의 해석
암모니아, 1 차/2 차 아민 및 아미노산은 모두 빛에 노출 될 때 깊은 자주색을 생성합니다.
히드 록시 프롤린과 프롤린에서 노란색이 생성됩니다.
아스파라긴을 사용하면 갈색이 생성됩니다.
색상 변화가 감지되지 않으면 분석 물이 아미노산, 아민 또는 암모니아를 포함하지 않는다고 가정합니다.
