1. 이온 교환 컬럼의 준비 :
- 이온 교환 컬럼에는 반대로 하전 된 분자 (이온)에 유치하고 결합 할 수있는 하전 된 그룹이 함유 된 수지가 함유된다.
- 수지는 양으로 하전 (양이온 교환 수지) 또는 음전 하전 (음이온 교환 수지) 일 수 있습니다.
2. 샘플 적용 :
- 아미노산 혼합물 또는 샘플은 이온 교환 컬럼에 적용됩니다.
3. 버퍼 솔루션 :
- 다양한 pH 및 염 농도를 갖는 다른 완충액 솔루션이 컬럼을 통해 전달됩니다.
4. 정전기 상호 작용 :
- 아미노산은 다양한 하전 된 기능 그룹의 존재로 인해 상이한 pH 값에서 다른 순 전하를 갖는다.
- 버퍼 솔루션이 컬럼을 통과함에 따라 아미노산은 순 전하에 따라 수지의 하전 된 그룹과 상호 작용합니다.
- 양으로 하전 된 아미노산 (양이온)은 양이온 교환 크로마토 그래피에서 음으로 하전 된 수지에 결합하는 반면, 음으로 하전 된 아미노산 (음이온)은 음이온 교환 크로마토 그래피에서 양으로 하전 된 수지에 결합 할 것이다.
5. 용리 :
- 완충 용액의 pH 또는 염 농도를 변경함으로써, 아미노산과 수지 사이의 정전기 상호 작용의 강도를 변형시킬 수있다.
- 완충 조건이 변함에 따라 다른 아미노산이 다른 시간에 컬럼에서 용리 (세척)됩니다.
-이 용리 과정은 전하 차이에 따라 아미노산을 분리합니다.
6. 탐지 및 수집 :
-아미노산이 컬럼에서 용리함에 따라, 자외선 (UV-Vis) 검출기와 같은 검출기를 사용하여 검출됩니다.
- 아미노산은 별도의 분획으로 수집 할 수 있습니다.
7. 분별 및 분석 :
- 수집 된 분획은 분리 된 아미노산의 동일성을 확인하기 위해 박막 크로마토 그래피 (TLC) 또는 전기 영동과 같은 기술을 사용하여 추가로 분석하고 특성화된다.
이온 교환 크로마토 그래피는 아미노산, 단백질 및 기타 하전 된 분자를 분리하고 정제하는 데 널리 사용됩니다. 특정 전하 특성에 기초하여 화합물의 분리에 대한 정확한 제어를 제공합니다.
