단백질 검출에 대한 색 반응의 원리
색 반응은 단백질을 검출하고 정량화하는 데 널리 사용됩니다. 그들은 단백질 분자 내의 특정 화학 그룹이 특정 시약과 반응하여 컬러 제품을 생산할 수 있다는 원리에 의존합니다. 생성 된 색의 강도는 존재하는 단백질의 양에 직접 비례합니다. 다음은 원칙의 고장입니다.
1. 특정 기능 그룹 :
-단백질은 아미노기 (-NH2), 카르 복실 그룹 (-COOH) 및 방향족 고리 (예를 들어, 티로신, 트립토판 및 페닐알라닌)를 포함한 다양한 기능 그룹을 함유한다.
-이 그룹은 특정 시약과 다르게 반응하여 컬러 제품을 형성합니다.
2. 화학 반응 :
- Biuret 반응 : 이 반응은 단백질에 존재하는 펩티드 결합과 cupric 이온 (Cu2+)의 반응을 포함한다. 결과 복합체는 바이올렛 색상을 생성합니다.
- lowry 반응 : 이 방법은 Tyrosine 및 Tryptophan 잔기에 의한 Folin-ciocalteu 시약의 감소와 Biuret 반응을 결합합니다. 결과적인 청색은 매우 민감하고 단백질 정량에 널리 사용됩니다.
- 브래드 포드 분석 : 이 방법은 단백질에 결합하고 갈색에서 파란색으로 색상을 변화시키는 쿠마시 브릴리언트 블루 G-250 염료를 사용합니다. 염기성 아미노산, 특히 아르기닌에 대한 염료의 친화력은 색 변화에 기여합니다.
- ninhydrin 반응 : 이 반응은 아미노산 및 펩티드의 유리 아미노기와 닌히 드린의 반응을 포함한다. 생성 된 자주색은 아미노산 및 펩티드를 감지하고 정량화하는 데 사용되지만 단백질에는 덜 민감합니다.
3. 분광 광도 측정 :
-이 반응에서 생성 된 색상 제품은 분광 광도계를 사용하여 측정됩니다.
- 특정 파장에서 용액의 흡광도는 단백질의 농도에 직접 비례합니다.
- 알려지지 않은 샘플의 흡광도를 알려진 단백질 농도를 사용하여 생성 된 표준 곡선과 비교함으로써 미지의 단백질 농도를 결정할 수 있습니다.
4. 색상 강도에 영향을 미치는 요인 :
- 단백질 농도 : 단백질 농도가 높을수록 더 강한 색이 생깁니다.
- pH : 각 반응은 최대 색상 개발을위한 최적의 pH 범위를 갖는다.
- 온도 : 온도는 반응 속도와 색 강도에 영향을 줄 수 있습니다.
- 간섭 물질 : 시약과 반응하는 다른 분자의 존재는 반응을 방해하고 부정확 한 결과를 초래할 수 있습니다.
5. 제한 사항 :
- 감도 : 모든 반응이 똑같이 민감한 것은 아닙니다. Lowry 및 Bradford 분석은 매우 민감하지만 Biuret 반응은 덜 민감합니다.
- 특이성 : 일부 반응은 특정 아미노산 또는 단백질 유형에 더 민감합니다.
- 간섭 : 샘플에 존재하는 간섭 물질은 색상 개발에 영향을 줄 수 있습니다.
결론 :
색 반응은 단백질 검출 및 정량화를위한 귀중한 도구입니다. 관련된 특정 기능 그룹, 발생하는 화학 반응 및 색상 강도에 영향을 미치는 요인을 포함하여 이러한 반응의 기본 원리를 이해하는 것은 정확하고 신뢰할 수있는 결과를 얻는 데 중요합니다.
